髙转移潜能肝癌细胞（MHCC-97H）

髙转移潜能肝癌细胞(MHCC-97H)
细胞介绍：
来源于中山医院【yuàn】，用人肝癌细胞株MHCC97-H接种裸【luǒ】鼠【shǔ】，进行3次肺转移筛选【xuǎn】，取肺转移【yí】瘤建【jiàn】成皮下接种后高度【dù】自发性肺转移的【de】肝【gān】癌细胞系

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】 DMEM 培养基(DMEM/F-12, GIBCO,添加 NaHC03 2.0g八)， 85%;马血清，10%;胎【tāi】牛血清，5%。
2.培养【yǎng】条件：气【qì】相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱 湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3. 冻存【cún】液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬液【yè】的冻存管【guǎn】在37°C水浴【yù】中迅速摇【yáo】晃【huǎng】解冻，加入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细胞【bāo】悬【xuán】液加入【rù】培养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
髙转移潜能肝癌细胞(MHCC-97H)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清，用【yòng】不含【hán】钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力【lì】口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-22分钟【zhōng】，然后在显微镜下【xià】观察【chá】细【xì】胞消化【huà】情况，若【ruò】细【xì】胞大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培【péi】养液【yè】后【hòu】吹匀。将【jiāng】细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养基的【de】新皿中或者瓶中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一：收集细胞，1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀，将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方【fāng】式，弃去半数【shù】培【péi】养基后【hòu】，将剩余细【xì】胞悬起，将细【xì】 胞悬液按【àn】1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞【bāo】冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好【hǎo】时，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去培养基【jī】后【hòu】加【jiā】入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清的培【péi】养基后【hòu】加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行【háng】冻存。悬浮细【xì】胞冻存【cún】时，应将细【xì】胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少【shǎo】量保【bǎo】存上清液（防止【zhǐ】细胞吸走)，加入【rù】部分【fèn】新鲜培养基，加入到冻存管【guǎn】中，在冻【dòng】存管中加【jiā】入1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到【dào】细【xì】胞后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损【sǔn】及细【xì】胞有污染，请立【lì】即【jí】与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为【wéi】有潜在的生【shēng】物危害性，必须在二级生物安全【quán】台内【nèi】操作，并请注意【yì】防护，所【suǒ】有废【fèi】液【yè】及接触过此细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
髙转移潜能肝癌细胞(MHCC-97H)运【yùn】输和保存：可选【xuǎn】择干【gàn】冰运输及发送复苏存【cún】活细胞方式【shì】：（1)干冰运输，收到【dào】后立即转【zhuǎn】入液氮冻存或【huò】直接复苏；（2)存活细胞【bāo】

，收到【dào】后【hòu】应继续【xù】生【shēng】长，传代达到细胞生长状态良好时，再【zài】进行冻存【cún】。具体操作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。