人骨肉瘤细胞（MG-63）

人骨肉瘤细胞(MG-63)
细胞介绍：
用聚次【cì】核【hé】苷-聚胞【bāo】嘧啶核苷酸和放线菌素D可【kě】以诱导产生高水平的干扰素。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM培养基【jī】(MEM，GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养【yǎng】基，10%DMSO,现用【yòng】现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水【shuǐ】浴中【zhōng】迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混【hún】合均【jun1】匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液【yè】加入培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将【jiāng】细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人骨肉瘤细胞(MG-63)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然【rán】后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若【ruò】细胞【bāo】大部 分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操【cāo】作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养瓶后【hòu】加【jiā】少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培养基的【de】新皿中或者 瓶【píng】中。

 
细【xì】胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存【cún】时，弃去【qù】培养【yǎng】基后【hòu】加入少量胰酶，细胞变圆脱落【luò】后【hòu】，加入约lml含血清的培养基【jī】后【hòu】加入冻存【cún】管中，再【zài】添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落【luò】、破【pò】损及细胞有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜在的【de】生物危害【hài】性，必须【xū】在二级【jí】生物安全台【tái】内【nèi】操作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：骨肉瘤
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人骨肉瘤细胞(MG-63)运输【shū】和保【bǎo】存：使【shǐ】用含有胎牛【niú】血清的2ml冻【dòng】存管发送存活【huó】细【xì】胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃【qì】去上【shàng】清【qīng】，加【jiā】入推荐使用的培养基【jī】后转移至l〇cm培【péi】养皿或【huò】者T25培养瓶中养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。