人膜间皮细胞（MeT-5A）

人膜间皮细胞(MeT-5A)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 Medium 199 培养基(添加 NaHC031.5g/L, 3.3 nM EGF，870门【mén】1/1牛胰岛素，20阳【yáng】1/11^?￡5，

3.87呢八1"1256〇3)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培【péi】养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管迅速放入37°C水浴中【zhōng】（水面要低于冻存管【guǎn】盖【gài】部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL

培养基的15ml离心管中混合【hé】均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，加入lmL培 养基后吹匀。然后【hòu】将所有细【xì】胞悬液移

入含【hán】有5ml培养基的【de】培【péi】养瓶【píng】中【zhōng】培养过夜。 第二天【tiān】换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膜间皮细胞(MeT-5A)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。力【lì】口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶【píng】中，置于【yú】37°C培【péi】养箱中消【xiāo】化9-22分钟，然后在显微镜下【xià】观【guān】察细胞消化情况【kuàng】，若细【xì】胞大【dà】部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养【yǎng】基终止消【xiāo】化。轻轻吹打后【hòu】吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去【qù】上清液【yè】，加入lmL培【péi】养液后吹匀【yún】。移入【rù】到事先准备好【hǎo】的含有5ml培养基【jī】的T-25培【péi】养瓶中或含有【yǒu】14ml培养基【jī】的【de】T-75培养瓶中培养。

 
细胞冻【dòng】存：待细【xì】胞生长状态【tài】良好【hǎo】时，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，先要消化处理并【bìng】进行细【xì】胞计数【shù】。消化方法按照细胞传代方法的9-22步骤进行， 后【hòu】的【de】重悬【xuán】液使用血清。悬浮细胞直接计【jì】数后离心，用【yòng】血【xuè】清【qīng】重悬【xuán】浮，加DMSO 至【zhì】终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每【měi】lml的数量【liàng】分配【pèi】到冻【dòng】存管中。本公司【sī】按每个冻存管细胞数目大【dà】于1X106个细胞冻存。

 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发【fā】现干【gàn】冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞【bāo】有污【wū】染，请立即与我们【men】电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台内【nèi】操作【zuò】，并请注意防护【hù】，所【suǒ】有废液【yè】及接触过【guò】此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：间皮
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膜间皮细胞(MeT-5A)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在【zài】显微【wēi】镜下确【què】认细胞生长状态，去掉封【fēng】口膜并将T25瓶【píng】置于37°C培【péi】养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞长满（90%以【yǐ】上【shàng】）请及时进行细胞【bāo】传代，传代【dài】培养用6ml本公【gōng】司【sī】附带的【de】*培养基。
5.接到细胞次【cì】日，请检查细胞【bāo】是否【fǒu】污染，若发【fā】现污染或疑【yí】似污染，请及时与【yǔ】我们取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。