前列腺癌细胞（MDA-PCa-2b）

前列腺癌细胞(MDA-PCa-2b)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 F-12K 培养基（F-12K: GIBCO)，添加 25 ng/mL霍乱毒【dú】素,10 ng/mL小鼠表皮【pí】生长因【yīn】子,0.005 mM磷酸乙醇胺,,,0.005 mg/mL牛胰岛素；胎【tāi】牛血清【qīng】，20%。

2.培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培【péi】养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用【yòng】现配。液【yè】氮储存。
  
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培养基【jī】混【hún】合【hé】均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞【bāo】悬液【yè】加入【rù】培养【yǎng】瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
前列腺癌细胞(MDA-PCa-2b)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化【huà】9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消【xiāo】化情【qíng】况，若细胞大部【bù】 分变圆并【bìng】脱落，迅速拿【ná】回【huí】操【cāo】作台，轻【qīng】敲几下培养瓶【píng】后，加少量【liàng】培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液，后吹匀。将细胞悬【xuán】液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新【xīn】皿中或者 瓶【píng】中【zhōng】。

细胞冻【dòng】存：待细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后【hòu】加入少量胰酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱【tuō】落后，加入

约lml含血清的培养基后【hòu】加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻【dòng】存【cún】。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存管【guǎn】瓶盖【gài】脱落、破损及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均视【shì】为有潜在的生【shēng】物危害性【xìng】，必须在二级生物安【ān】全台【tái】内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废液及接触过此【cǐ】细胞的器皿需

要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
前列腺癌细胞(MDA-PCa-2b)运输和【hé】保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存【cún】管发【fā】送存活【huó】细胞。收到细胞后， 可在【zài】1000RPM，常【cháng】温条件下，离心5min后，于洁

净【jìng】操作台弃去【qù】上清，加入【rù】推【tuī】荐使用的培【péi】养基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞生【shēng】长状态良【liáng】好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。