人ruxian癌细胞（MDA-MB-435S）

人ruxian癌细胞(MDA-MB-435S)
细胞介绍：
MDA-MB-435S是【shì】一种【zhǒng】纺【fǎng】锤【chuí】形的细胞，1976年由其亲本(MDA-MB-435)中筛选得到。MDA-MB-435是从一名【míng】31岁【suì】的转移性ruxian导管腺癌

女性患者胸水中分离得到【dào】的。 但近来证明MDA-MB-435细胞被M14黑【hēi】色素瘤【liú】细胞【bāo】污染。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备L-15培【péi】养基(L-15:GIBC0)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储【chǔ】存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇【yáo】晃解冻，加 入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟

，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有【yǒu】细胞悬液【yè】加【jiā】入【rù】培养瓶中培【péi】养过夜【yè】（或将【jiāng】 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】

8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
  
人ruxian癌细胞(MDA-MB-435S)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C

培养箱中消化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察【chá】细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱【tuō】落，迅速【sù】拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下【xià】培养瓶后

加少量培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养【yǎng】基【jī】，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。 将细胞悬液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培【péi】养基的【de】新皿中或者瓶【píng】中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一【yī】：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL 培养液后【hòu】吹匀，将细胞悬【xuán】液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数【shù】换液方式，弃去半数培【péi】养基后【hòu】，将剩余细胞悬起【qǐ】，将【jiāng】细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 3的比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。

 
细【xì】胞冻存：待【dài】细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细【xì】胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存【cún】时【shí】，弃去培养基【jī】后加入少【shǎo】量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清的培【péi】养基后【hòu】 加入【rù】冻存管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。悬【xuán】浮细【xì】胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下【xià】离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走【zǒu】)，加【jiā】入部分【fèn】新鲜培养【yǎng】基，加入到冻【dòng】存管中，在冻存管【guǎn】中加入1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。

 
注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰己【jǐ】挥发干净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生物安全台内操【cāo】作【zuò】，并请注意防【fáng】护【hù】，所有废液及接【jiē】触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细 特性：
1)来源：ruxian导管腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人ruxian癌细胞(MDA-MB-435S)运【yùn】输和保存【cún】：可选择干【gàn】冰运输及发送【sòng】复苏存活细胞方式【shì】：（1)干冰【bīng】运输，收到后立【lì】即转入液氮冻存或【huò】直接复苏【sū】；（2)存活细胞

，收【shōu】到【dào】后应【yīng】继续生长【zhǎng】，传代达到细胞生长状态【tài】良好时【shí】，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。