人ruxian癌阿霉素耐药细胞（MCF-7/Adr

人ruxian癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/Adr)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注【zhù】意：培养瓶里面【miàn】的培养【yǎng】液是【shì】不【bú】含药【yào】物的【de】，待细【xì】胞长到9-22%汇合度时，去掉培养液，加含500ng/ml阿霉素药物的培养液，放入培养箱，这段【duàn】时间会有少【shǎo】部分细胞悬浮【fú】起来【lái】，属于正常情【qíng】况【kuàng】，通【tōng】过换液可以去掉，等细胞长满就可以消化【huà】 传代了，这时可以【yǐ】一【yī】直用【yòng】含药物培养基来培养细胞，两代之【zhī】后就【jiù】可【kě】以将药物浓 度提髙【gāo】到l〇〇〇ng/ml，细胞【bāo】冻存时不要在培养基中加药物。

1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO);北【běi】美【měi】胎牛血清 (United States, GIBCO)，

10%;双抗【kàng】 1%，添加【jiā】 2mML-GUJ，添加 luM Adr。
2.培养条件：气【qì】相：空【kōng】气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基【jī】后吹【chuī】匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将 细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

2.细【xì】胞传代：如【rú】果细【xì】胞密度达【dá】80%-90%，即可进行传代培养。弃去培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消【xiāo】化【huà】液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培【péi】养箱中【zhōng】消化9-22分钟，然后在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若【ruò】细胞大部【bù】 分变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培【péi】养瓶后加少量培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基【jī】，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将【jiāng】细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含【hán】8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。

 
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞【bāo】冻存时，弃去培【péi】养【yǎng】基【jī】后，PBS清洗瓶底9-22次后加入lml胰酶【méi】，细胞变【biàn】圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可【kě】使用血球【qiú】计数板计数。1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓【nóng】度为【wéi】 10%。加入DMSO后迅【xùn】速混匀，按【àn】每【měi】lml的【de】数量【liàng】分配到冻存管中，注意冻存管做好标【biāo】识。本公【gōng】司按每【měi】个【gè】冻存【cún】管细【xì】胞数目大于【yú】1X106个细胞冻存。将冻存【cún】管置于程序降【jiàng】温盒中【zhōng】，放入-80度冰箱，至少2个小时以【yǐ】后转入液氮灌储存。记录冻存【cún】管位【wèi】置【zhì】以便下次拿【ná】取。

 
人ruxian癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/Adr)注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请立即【jí】与我【wǒ】们【men】电联。
所有动【dòng】物细胞均视为【wéi】有潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操【cāo】作，并【bìng】请注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的【de】器皿【mǐn】需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：ruxian癌
2)形态：上皮细胞样贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人ruxian癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/Adr)运输和【hé】保存：可选择干冰运【yùn】输及发送复苏存活细胞方【fāng】式：（1)干冰运输【shū】，收到后【hòu】立即【jí】转入液氮冻【dòng】存【cún】或直【zhí】接复苏；（2)存活细胞【bāo】

，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状【zhuàng】态【tài】良好时，再【zài】进行【háng】冻存【cún】。具体【tǐ】操作见细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。