人肝星形细胞（LX-2）

人肝星形细胞(LX-2)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条【tiáo】件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养箱【xiāng】湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现【xiàn】配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的【de】冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加【jiā】入4mL培【péi】养基混合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝星形细胞(LX-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消【xiāo】化【huà】9-22分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若【ruò】细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶【píng】后加少量培养基终止消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出【chū】，在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或【huò】者【zhě】瓶中。

 
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好【hǎo】时，可进行细【xì】胞【bāo】冻【dòng】存【cún】。贴壁细【xì】胞冻存时，弃去培养基后加【jiā】入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱【tuō】落后，加入【rù】约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。

 
注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干【gàn】净、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电联【lián】。
所有动物细胞【bāo】均【jun1】视为有【yǒu】潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级生物【wù】安全台内操作，并请注意【yì】防护，所【suǒ】有废【fèi】液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝星形细胞(LX-2)运【yùn】输和保存：使用含有胎牛【niú】血清的2ml冻存管【guǎn】发【fā】送存活细胞。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于【yú】洁净操作台弃去上【shàng】清，加入推荐使【shǐ】用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞【bāo】生【shēng】长【zhǎng】 状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。