人结直肠腺癌细胞（LoVo）

人结直肠腺癌细胞(LoVo)
一.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培【péi】养基（F-12K，GIBC0)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2. 培养条【tiáo】件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储【chǔ】存。
 
1)复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加【jiā】入【rù】4mL培【péi】养基【jī】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所有细胞悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶中培养过夜【yè】（或【huò】将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 

2)细胞传代【dài】：如果细胞密【mì】度达80%-90%，即可进行传代培【péi】养。
 
人结直肠腺癌细胞(LoVo)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观【guān】察【chá】细【xì】胞消化情【qíng】况，若【ruò】细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶【píng】后加少量培养基【jī】终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细【xì】胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培【péi】养基【jī】的新皿中或者瓶【píng】中【zhōng】。

 
细【xì】胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，可【kě】进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去【qù】培养基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加入约lml含血清的培养基后加【jiā】入冻存管【guǎn】中，再添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进【jìn】行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己【jǐ】挥发【fā】干净、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立即与我们【men】电联。
所有动【dòng】物细胞【bāo】均视为有潜【qián】在的生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台内操作【zuò】，并请注意【yì】防【fáng】护，所有废液及接触过【guò】此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：结直肠腺癌
2)形态：上皮样细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl01 2 * * * 6 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(LoVo)运输和【hé】保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收到细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后【hòu】，于洁净【jìng】操【cāo】作台弃去上清，加入推荐使用的【de】培养基【jī】后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者【zhě】T25培养瓶【píng】中培养，传代达到细【xì】胞生长状态良好【hǎo】时【shí】，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤：