人正常肝细胞 （L-02）

人正常肝细胞 (L-02)
细胞介绍：
L-02细胞建【jiàn】系鉴定于【yú】1980年。该细胞是一株正常【cháng】肝细胞系，具【jù】有典型的肝细胞形态【tài】学特征，可【kě】用于多种实【shí】验研究。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，80%;北美胎牛【niú】血清，20%。
2.培【péi】养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加【jiā】入【rù】4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入【rù】培养瓶【píng】中【zhōng】培养过【guò】夜（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人正常肝细胞 (L-02)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用【yòng】不含钙、镁【měi】离子的【de】PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养【yǎng】箱中消化9-22分钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细【xì】胞大部分变圆并脱落，迅【xùn】速【sù】拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量培养【yǎng】基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新【xīn】的【de】含【hán】8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶【píng】中。

 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行【háng】细【xì】胞冻【dòng】存【cún】。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细【xì】胞计数【shù】。消化【huà】方法按照细胞传代方法的9-22步骤进行【háng】，后的重悬液使用【yòng】血清【qīng】。加DMSO至终浓度为10%，加入DMSO后迅速混匀【yún】，按每【měi】lml的数量分配到冻【dòng】存【cún】管【guǎn】中。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X106个细胞冻存。

 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染【rǎn】，请【qǐng】立【lì】即【jí】与我们电联。
所有【yǒu】动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作【zuò】，并【bìng】请【qǐng】注意防护【hù】，所【suǒ】有废液及接触过【guò】此细【xì】胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：肝脏
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人正常肝细胞 (L-02)运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻存【cún】管发送【sòng】存活细胞。收到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温【wēn】条【tiáo】件下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清，加入推【tuī】荐使【shǐ】用的培养【yǎng】基【jī】后转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养瓶中【zhōng】培【péi】养，传代达到细胞生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。