人前列腺癌细胞 （LNCaP）

人前列腺癌细胞 (LNCaP)
细胞介绍：
人前列腺癌细胞LNCaP克隆FGC是【shì】从一位【wèi】50岁【suì】白人男性(血型B+)的左锁骨【gǔ】淋巴 结针刺活【huó】检【jiǎn】中【zhōng】分离，该【gāi】患【huàn】者经确【què】诊为前列腺癌转移。这【zhè】株细胞对5-ct-二氢睾酮(生【shēng】长调【diào】节子和酸性【xìng】磷酸脂酶产物)有响应。这株【zhū】细胞并不形【xíng】成【chéng】*的【de】单层，而是形 成集落，在【zài】传代时可以用滴管反复【fù】吹吸打【dǎ】碎【suì】。它们仅仅轻【qīng】轻【qīng】地吸附在基底【dǐ】上【shàng】，不 形成【chéng】汇合，很【hěn】快使培养基变酸。生长很慢，传代后48小时内【nèi】不【bú】应【yīng】扰动。当培养 瓶封包后，多数细【xì】胞从培养瓶【píng】底【dǐ】分【fèn】离【lí】，悬浮在培【péi】养基中。收【shōu】到后，在通常培养单 层细胞的【de】条件下培养24到48小时，以使【shǐ】细胞再贴壁。此后可【kě】以换上新鲜培养【yǎng】液。如果需要，培养瓶【píng】内【nèi】容物可【kě】以收集，300g离心15分钟【zhōng】，以【yǐ】10毫升培养液重悬 并培养到一【yī】个单【dān】独的培养瓶中。请使【shǐ】用Coming的Cellbind培养瓶培【péi】养。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙【bǐng】酮酸【suān】钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养【yǎng】条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培【péi】养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬【xuán】液的【de】冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速【sù】摇【yáo】晃解冻，加【jiā】入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人前列腺癌细胞 (LNCaP)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力【lì】口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化【huà】9-22分【fèn】钟，然后在【zài】显微镜下观察【chá】细胞【bāo】消化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培养【yǎng】基，轻轻打匀【yún】后吸出，在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，补加l-2mL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培【péi】养基的【de】新【xīn】皿中或者 瓶中。

 
细胞冻存：待细胞生【shēng】长状态【tài】良好时【shí】，可【kě】进行细【xì】胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入【rù】约【yuē】lml含血【xuè】清的培养【yǎng】基后加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。

 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电【diàn】联。
所有动物【wù】细胞均【jun1】视为有潜在【zài】的生物危害性，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并请注意防护【hù】，所有废液及【jí】接触过此【cǐ】细【xì】胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：前列腺；左锁骨淋巴结癌转移灶
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人前列腺癌细胞 (LNCaP)运输和【hé】保存：可选【xuǎn】择干冰运【yùn】输及【jí】发送【sòng】复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存【cún】或直接复苏【sū】；（2)存活细胞，收【shōu】到后应【yīng】继续生【shēng】长，传【chuán】代达到【dào】细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时，再进行冻存【cún】。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。