人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞

人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】NaHC031.5g八, D-葡萄糖【táng】2.5g八，丙酮酸钠O.llg八【bā】，0.01mg/ml牛胰岛素，10|ag/mL环丙沙星)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度【dù】，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹【chuī】匀。然后【hòu】将所有细胞悬【xuán】液加入培养瓶【píng】中培养过【guò】夜（或将细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置【zhì】于37°C培养箱【xiāng】中消化【huà】9-22分钟，然【rán】后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操【cāo】作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后加少量培养基终【zhōng】止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀【yún】后【hòu】吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。

 
将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培【péi】养基的新皿中【zhōng】或者瓶【píng】中。
细胞【bāo】冻存【cún】：待细胞生【shēng】长状态良【liáng】好时【shí】，可【kě】进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培【péi】养基后加【jiā】入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发【fā】现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请立【lì】即【jí】与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的【de】生物【wù】危害性，必须在二级【jí】生物安全台内操【cāo】作，并请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废液及接【jiē】触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞运【yùn】输和保存：使用含有胎【tāi】牛血清的2ml冻存【cún】管发送存活细胞。收【shōu】到细胞后【hòu】，可在1000RPM，常【cháng】温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操【cāo】作台弃去上清，加【jiā】入推【tuī】荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或【huò】者T25培养瓶【píng】中【zhōng】培养，传代达到细胞生长状态【tài】良【liáng】好时【shí】，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。