人慢性粒细胞白血病细胞 （KCL-22）

人慢性粒细胞白血病细胞 (KCL-22)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄【táo】糖2.5八，丙酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清。

2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿为【wéi】70%-80%。

3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存【cún】管在【zài】37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基混【hún】合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或【huò】将【jiāng】 细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人慢性粒细胞白血病细胞 (KCL-22)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清【qīng】，用不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-22分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部 分变圆【yuán】并脱【tuō】落，迅【xùn】速拿回操作【zuò】台，轻【qīng】敲【qiāo】几下培养瓶后【hòu】加【jiā】少【shǎo】量【liàng】培养基终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的【de】比【bǐ】例分到新的【de】含8ml培养基的新皿中或者 瓶中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一【yī】：收集细胞【bāo】，1000RPM，常温【wēn】条件下离心5分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹句，将细【xì】胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方【fāng】法二：可选【xuǎn】择半【bàn】数换液方式，弃去半数培养基后，将剩【shèng】余细胞悬起，将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的【de】含8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行【háng】细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去培【péi】养基后加入少量【liàng】胰酶【méi】，细【xì】胞变【biàn】圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后 加【jiā】入冻存【cún】管【guǎn】中，再添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后进【jìn】行冻存【cún】。悬浮细胞冻存时，应将【jiāng】细胞收集，1000RPM，常温条件【jiàn】下离【lí】心5分钟，少【shǎo】量保存上清液（防止细胞【bāo】吸走），加入部【bù】分新鲜培养基【jī】，吹打均匀【yún】后，加入到冻存【cún】管中【zhōng】，在冻【dòng】存管中【zhōng】加入10%DMSO摇匀后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻【dòng】存【cún】管【guǎn】瓶盖【gài】脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物【wù】危害性，必须在二级生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并请注意防护，所有【yǒu】废液【yè】及接【jiē】触【chù】过此【cǐ】细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：粒性白血病
2)形态：圆形，悬浮生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人慢性粒细胞白血病细胞 (KCL-22)运【yùn】输和保存【cún】：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常温条件下【xià】，离【lí】心【xīn】5min后，于洁

净操作台弃去上清【qīng】，加入推荐【jiàn】使用的培养【yǎng】基后转移【yí】至l〇cm培养【yǎng】皿或【huò】者T25培养瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞生长 状【zhuàng】态【tài】良好时，再【zài】进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。