人绒毛膜癌细胞 （JEG-3）

人绒毛膜癌细胞 (JEG-3)
细胞介绍：
这是【shì】一【yī】株超三倍体人类细胞株。其典型【xíng】染色【sè】体数为71，发【fā】生率为34%，多倍体率为2_6%。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM培养基(GIBCO,添【tiān】加NaHC031.5g/L，丙酮酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬液的冻【dòng】存【cún】管【guǎn】迅速放入37°C水浴中【zhōng】（水面要低于冻存管【guǎn】盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含【hán】有【yǒu】4mL培养基的【de】15ml离【lí】心管中混合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液【yè】，加入【rù】lmL培养基【jī】后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬【xuán】液移入含【hán】有【yǒu】5ml培养基【jī】的培养瓶中培养过夜。第二【èr】天换液并检查细胞密度。

 
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人绒毛膜癌细胞 (JEG-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含【hán】钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗细【xì】胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中【zhōng】消【xiāo】化9-22分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加【jiā】入3ml此细胞的【de】 培养基【jī】终止消【xiāo】化【huà】。轻轻吹打【dǎ】后吸出，移入【rù】15ml离心【xīn】管中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，加入lmL培养液后【hòu】吹匀。移入到事先准备【bèi】好的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培养瓶中或含有14ml培【péi】养【yǎng】 基的T-75培养瓶中培养【yǎng】。

 
细【xì】胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化【huà】方【fāng】法【fǎ】按【àn】照细胞【bāo】传代方法的9-22步骤进行，后的【de】重悬液使用血清。悬浮细胞直接计【jì】数【shù】后离心，用血【xuè】清【qīng】重悬浮，加DMSO 至终浓度为10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每【měi】lml的数量分配到冻存管 中。本公司按每【měi】个冻存管细【xì】胞数目大于【yú】1X106个细胞冻【dòng】存【cún】。悬【xuán】浮细胞冻存时，应【yīng】将【jiāng】细【xì】胞【bāo】收【shōu】集，1000RPM，常温条件下离心5分【fèn】钟，少量保存上清液（防止细胞吸走)，加入【rù】部分新鲜培养基，吹【chuī】打均匀后【hòu】，加入到【dào】冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。

 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干【gàn】冰己挥发【fā】干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在的生【shēng】物危害【hài】性【xìng】，必须在二级生【shēng】物安全台内【nèi】操作，并【bìng】请【qǐng】注意防护，所有废液及接触过此细胞的器【qì】皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

  
细胞特性：
1)来源：绒毛膜癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人绒毛膜癌细胞 (JEG-3)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认【rèn】细胞生长【zhǎng】状态，去【qù】掉封口膜并【bìng】将T25瓶置于【yú】37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满（90%以上）请及时进【jìn】行细胞传代，传【chuán】代【dài】培养【yǎng】用6ml本公司附带【dài】的*培养【yǎng】基。
5.接【jiē】到细胞次【cì】日，请检查细胞是否污染，若发【fā】现污染或疑似污染，请及时【shí】与【yǔ】我们取得【dé】电联。
细胞用途：仅供使用。