子宫内膜癌细胞 （Ishikawa）

子宫内膜癌细胞 (Ishikawa)
细胞培养步骤:
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 D/F12 培养基(GIBCO，10565-018)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现【xiàn】配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速【sù】摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过【guò】夜【yè】（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
子宫内膜癌细胞 (Ishikawa)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后【hòu】在显微镜下观察细胞【bāo】消化情【qíng】况，若细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台【tái】，轻【qīng】敲几下培养瓶【píng】后加少量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养【yǎng】基，轻轻打匀【yún】后吸【xī】出在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例【lì】分到新的含8ml培【péi】养基的【de】新【xīn】皿中或者瓶中。

 
3)细胞冻存【cún】：待【dài】细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃去培养基后加入【rù】少量胰【yí】酶，细【xì】胞变圆脱落后，加入【rù】约lml含血【xuè】清的培养【yǎng】基后加入冻存管中【zhōng】，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污【wū】染【rǎn】，请立即【jí】与我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的【de】生物危害性，必【bì】须在二级生【shēng】物安全台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及【jí】接触过【guò】此细【xì】胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性:
1)来源：子宫内膜癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
子宫内膜癌细胞 (Ishikawa)运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛【niú】血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收【shōu】到细胞后，可在【zài】1000RPM，常【cháng】温条【tiáo】件下，离心5min后，于洁【jié】净操作台弃去【qù】上【shàng】清，加入【rù】推荐【jiàn】使用的培养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培养瓶【píng】中培养【yǎng】，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。