人静脉内皮细胞 （HUV-EC）

人静脉内皮细胞 (HUV-EC)
细胞介绍：
该细胞来【lái】源于人静脉内皮【pí】，可在半固体培养基中形【xíng】成克隆，在【zài】免疫抑制【zhì】小鼠【shǔ】中不【bú】能形【xíng】成肿瘤。
 
细胞接收后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在【zài】显微镜下确【què】认细胞生长状【zhuàng】态，酒【jiǔ】精消毒瓶壁【bì】并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h。
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞长满80%-90%请及【jí】时进行细【xì】胞传【chuán】代，传代培养用本公司【sī】附带的*
培养基。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 F-12K 培【péi】养【yǎng】基【jī】(F-12K:SIGMA,添加 0.1 mg/ml 肝素【sù】;0.9-22.05 mg/ml内皮细胞生长因子)，90%;胎牛血清，10%。

2.培养【yǎng】条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻【dòng】存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液【yè】加入【rù】培养瓶中培养过夜（或【huò】将细胞悬液【yè】加入10cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人静脉内皮细胞 (HUV-EC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用【yòng】不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消化9-22分【fèn】钟，然后【hòu】在显【xiǎn】微镜下观察【chá】细胞消化情况【kuàng】，若【ruò】细胞大部分变圆并脱落【luò】，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】加少量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的【de】比例分到【dào】新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者【zhě】瓶中【zhōng】。

 
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞冻存【cún】时，弃去【qù】培养基后【hòu】，PBS清洗瓶底9-22次后【hòu】加入lml胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】2ml*培养基【jī】终止消化，可使用血球计数板计【jì】数【shù】。lOOOrpm离心分钟去掉上清。用【yòng】血【xuè】清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配【pèi】到冻存管中【zhōng】，注意冻存【cún】管【guǎn】做好标识。本【běn】公司按每个冻存管细胞数目大于【yú】1X106个【gè】细胞冻存【cún】。将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少【shǎo】2个小时以后转入液氮灌【guàn】储【chǔ】存【cún】。记【jì】录冻存管【guǎn】位【wèi】置以便下次拿【ná】取。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污【wū】染，请立即与我们【men】电【diàn】联。
所有【yǒu】动物细胞均视为【wéi】有【yǒu】潜在的生物危害【hài】性【xìng】，必须在二级生物安全【quán】台内【nèi】操作，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触过此细胞的【de】器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：人静脉内皮
2)形态：内皮细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人静脉内皮细胞 (HUV-EC)运输和【hé】保存：可选择【zé】干冰【bīng】运输及发送复【fù】苏【sū】存活细胞方式：（1)干【gàn】冰【bīng】运输，收到后立即【jí】转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接【jiē】复苏【sū】；

（2)存【cún】活细胞，收到后应继【jì】续生长，传代达到细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细【xì】胞培【péi】养步骤【zhòu】。收到细【xì】胞【bāo】后【hòu】请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们电联。

细胞用途：仅供使用。