人十二脂肠腺癌 （HuTu-80）

人十二脂肠腺癌 (HuTu-80)
细胞介绍：
该细胞上蛙皮素受体的位点多达6000个。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle ’s Balanced Salts) ,10%FBS 。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度【dù】：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基【jī】，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细胞悬液的【de】冻存管在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速【sù】摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入【rù】培【péi】养瓶【píng】中培【péi】养过夜（或将【jiāng】细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人十二脂肠腺癌 (HuTu-80)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培【péi】养上清，用【yòng】不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化9-22分钟【zhōng】，然后在显微镜下观【guān】察细胞消化情【qíng】况，若细胞大【dà】部 分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操作【zuò】台，轻敲几下养【yǎng】瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基【jī】终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液【yè】后【hòu】吹匀。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含【hán】8ml培养基的新皿【mǐn】中。

 
细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良【liáng】好时，可【kě】进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基【jī】后加入少量胰【yí】酶，细胞变【biàn】圆脱【tuō】落【luò】后，加入约lml含血清的培养基后加入冻【dòng】存管中【zhōng】，再【zài】添【tiān】加10%DMSO后进行【háng】冻存。

 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电联【lián】。
所有【yǒu】动物【wù】细胞均【jun1】视为有潜【qián】在的生物危【wēi】害性，必须在二【èr】级生物安【ān】全台内操作，并请注【zhù】意【yì】防护，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：十二指肠
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人十二脂肠腺癌 (HuTu-80)运输和保【bǎo】存：使用【yòng】含有胎【tāi】牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送存活【huó】细胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离【lí】心5min后【hòu】，于洁净操作台弃去【qù】上【shàng】清，加入推荐使【shǐ】用的【de】培养基【jī】后转移至l〇cm培【péi】养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。