人肝癌细胞（HuH-7）

人肝癌细胞(HuH-7)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，添加【jiā】 1% NEAA，胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细【xì】胞悬【xuán】液加入培养瓶中培养过【guò】夜（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(HuH-7)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子的【de】PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培【péi】养箱【xiāng】中消化【huà】9-22分钟，然【rán】后在显微镜下【xià】观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部 分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培【péi】养瓶【píng】后加少【shǎo】量【liàng】培【péi】养【yǎng】基终止 消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，弃去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养【yǎng】基的新皿中或【huò】者瓶中。

 
3)细胞【bāo】冻存：待【dài】细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培养基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后【hòu】，加【jiā】入【rù】约lml含血清的培养基【jī】后加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖脱落【luò】、破损及【jí】细胞有污染，请立即与我们电【diàn】联。
所有动物细胞均视【shì】为有【yǒu】潜【qián】在的生物危害【hài】性，必须在二【èr】级生物安全台内操作，并请【qǐng】注意【yì】防护，所有废液及接触过此细【xì】胞【bāo】的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。

 
人肝癌细胞(HuH-7)细胞特性：
1)来源：肝
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存【cún】：使用【yòng】含有胎牛血清【qīng】的2ml冻存管发送存活细【xì】胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下【xià】，离【lí】心5min后，于【yú】洁【jié】净操作台弃【qì】去上【shàng】清，加【jiā】入推荐使用的【de】培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶【píng】中培【péi】养，传代达到细胞生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。