人肝癌细胞（Huh7.5）

人肝癌细胞(Huh7.5)
细胞介绍：
该细胞可被细【xì】胞培养体【tǐ】系的HCV所感染【rǎn】。为模【mó】拟人体【tǐ】内【nèi】环境【jìng】，可【kě】选择Huh7.5作为NKs的靶细胞，用于检测NK细胞杀伤功能。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2. 培【péi】养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基混合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养【yǎng】基后【hòu】吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(Huh7.5)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清【qīng】，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化【huà】9-22分钟，然后在【zài】显微镜【jìng】下观【guān】察细胞【bāo】消化情况，若细【xì】胞大部分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】加【jiā】少量培养【yǎng】基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打匀【yún】后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含【hán】8ml培养基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶中。

细胞冻存【cún】：待细胞生长状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培养【yǎng】基后加入少量胰【yí】酶，细胞变【biàn】圆【yuán】脱【tuō】落后，加入约lml含血【xuè】清的【de】培养基后加入【rù】冻存【cún】管中，再【zài】添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥【huī】发干【gàn】净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与【yǔ】我们电联。
所有【yǒu】动【dòng】物细胞均视为有潜在的【de】生【shēng】物危害性，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请注意防护，所有废【fèi】液【yè】及接【jiē】触过此【cǐ】细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(Huh7.5)运输【shū】和保【bǎo】存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发【fā】送存活细胞。收到细胞后【hòu】，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推【tuī】荐使【shǐ】用的培养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿【mǐn】或者T25培养瓶中【zhōng】培【péi】养，传代达【dá】到细胞【bāo】生【shēng】长 状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。