人眼小梁网细胞 （HTMC）

人眼小梁网细胞 (HTMC)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM-F12 培养基(DMEM-F12:GIBCO)，85%;胎牛【niú】血清，15%。PS: 1%。
2. 培养【yǎng】条件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱【xiāng】湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基【jī】，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速【sù】摇晃解【jiě】冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶中培养【yǎng】过夜（或将【jiāng】细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人眼小梁网细胞 (HTMC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁【měi】离【lí】子【zǐ】的【de】PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜下观察【chá】细【xì】胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培【péi】养【yǎng】瓶后加少量培养基【jī】终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分【fèn】 钟，弃【qì】去【qù】上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液后吹【chuī】匀。 将【jiāng】细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比【bǐ】例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。

 
3)细胞冻存：待细胞生长状态【tài】良好【hǎo】时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时【shí】，弃【qì】去【qù】培养基后加入少量胰【yí】酶，细胞变圆脱落【luò】后，加入约lml含血清【qīng】的培养基后加【jiā】入冻【dòng】存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻【dòng】存。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们【men】电联【lián】。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在的生物危害性【xìng】，必须在二【èr】级生物【wù】安【ān】全【quán】台内操作，并【bìng】请注意防护，所【suǒ】有废液及接【jiē】触过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：人眼
2)形态：上皮细胞样、贴壁
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人眼小梁网细胞 (HTMC)输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血【xuè】清的2ml冻【dòng】存管【guǎn】发送存活细胞。收到细胞后【hòu】， 可在1000RPM，常【cháng】温条件【jiàn】下，离【lí】心5min后【hòu】，于洁净操【cāo】作台弃去【qù】上清，加入推荐【jiàn】使用的【de】培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞【bāo】生长【zhǎng】状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。