人结肠癌细胞（HT-29）

人结肠癌细胞(HT-29)
细胞介绍：
1964年，HT-29细【xì】胞系由j.Fogh用移植培养方法和含15%FBS的F12培【péi】养液从【cóng】原
发性肿瘤【liú】分离。近来，己【jǐ】建株的【de】培养细胞用含血清【qīng】McCoy's 5A培液培养。该细胞系【xì】在裸鼠中致瘤，也【yě】能在类【lèi】固醇处理的【de】地鼠【shǔ】中致瘤。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCoy's 5A 培【péi】养【yǎng】基(McCoy's 5A，GIBC0)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培【péi】养条件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基【jī】，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养【yǎng】基混合【hé】均匀【yún】。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然【rán】后【hòu】将【jiāng】所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中【zhōng】培养过夜（或将细胞悬液【yè】加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌细胞(HT-29)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-22分【fèn】钟，然后在显微镜【jìng】下观【guān】察细胞消【xiāo】化情况，若【ruò】细胞大部分变圆并脱落【luò】，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加少【shǎo】量【liàng】培养基【jī】终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶中。

 
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃去【qù】培养【yǎng】基后加【jiā】入少量胰酶，细【xì】胞变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血清的培【péi】养基【jī】后【hòu】 加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行【háng】冻存。

 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们【men】电【diàn】联。
所【suǒ】有动物细胞均视为有潜在的生物【wù】危【wēi】害性，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并请【qǐng】注【zhù】意防【fáng】护，所有废液及接【jiē】触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌细胞(HT-29)运输和保存：使【shǐ】用含有【yǒu】胎牛【niú】血清的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收【shōu】到细胞后【hòu】，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作【zuò】台弃去上清【qīng】，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或【huò】者【zhě】T25培【péi】养瓶中培养【yǎng】，传代【dài】达到细胞【bāo】生【shēng】长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。