人皮肤成纤维细胞（HSF）

人皮肤成纤维细胞(HSF)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM 培养【yǎng】基【jī】(DMEM，GIBCO)，85%;北美胎牛血清(United StatesGIBCO15%）。

2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37°C，培养箱湿度 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速【sù】放入【rù】37°C水浴中（水面要低于冻存【cún】管【guǎn】盖【gài】部【bù】）摇晃解冻，移入事先准备好的含【hán】有【yǒu】4mL培养基的15ml离心管【guǎn】中混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液，加入lmL培养基【jī】后吹匀。然后【hòu】将【jiāng】所有细胞悬液移入含有5ml培养【yǎng】基的培养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】。第二天【tiān】换液并检查【chá】细胞密【mì】度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人皮肤成纤维细胞(HSF)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。加2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱【xiāng】中【zhōng】消【xiāo】化9-22分钟，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部分变圆【yuán】并【bìng】脱【tuō】落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后【hòu】加入3ml此【cǐ】细胞的培【péi】养【yǎng】基终【zhōng】止【zhǐ】消化。轻轻吹【chuī】打后吸出，移入【rù】15ml离心管中，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，加入lmL培养液后【hòu】吹【chuī】匀。移入到事先准备好的含有5ml培【péi】养基的T-25培养瓶中【zhōng】或含有14ml培养基的 T-75培养瓶【píng】中培养。

 
细【xì】胞【bāo】冻存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，先要消化处【chù】理并进【jìn】行细胞【bāo】计数。消化方法按照细【xì】胞传代方法的9-22步骤进行，后【hòu】的重悬液【yè】使用血清。加DMSO至【zhì】终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀【yún】，按每lml的数量分【fèn】配【pèi】到冻存【cún】管【guǎn】中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖【gài】脱落【luò】、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即与我们电【diàn】联。
所有动物细胞【bāo】均【jun1】视为有潜在的【de】生物危【wēi】害性【xìng】，必须在二级【jí】生【shēng】物安全台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及【jí】接触【chù】过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：人
2)形态：贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人皮肤成纤维细胞(HSF)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜下确【què】认细胞生长状【zhuàng】态，去掉封【fēng】口膜并【bìng】将T25瓶置【zhì】于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果【guǒ】细胞长满（90%以上）请及时【shí】进行细胞传代，传代培养【yǎng】用【yòng】6ml本【běn】公司附带的【de】*培养基。
5.接到细胞【bāo】次日，请检查【chá】细胞是否【fǒu】污染，若发现污染或疑似污染【rǎn】，请及时与我【wǒ】们取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。