人胰腺癌细胞 （HPAC）

人胰腺癌细胞 (HPAC)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM培养基(GIBCO,添加NaHC031.5g)，90%;胎牛【niú】血清【qīng】，10%。
2. 培【péi】养【yǎng】条【tiáo】件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏【shì】度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中【zhōng】迅速【sù】摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基混【hún】合【hé】均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或【huò】将细胞悬【xuán】液【yè】加【jiā】入l〇cm皿中【zhōng】，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胰腺癌细胞 (HPAC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口【kǒu】2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在【zài】显【xiǎn】微镜下观察【chá】细胞消化情况【kuàng】，若细【xì】胞【bāo】大部【bù】 分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台【tái】，轻敲几下培【péi】养瓶后加少【shǎo】量培养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后【hòu】吸出，在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后【hòu】吹匀。 将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的【de】含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶【píng】中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一：收【shōu】集细【xì】胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，补加l-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的【de】比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数【shù】换液方式，弃【qì】去半数培养基【jī】后，将剩余【yú】细胞悬起，将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 3的【de】比【bǐ】例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。

 
细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良【liáng】好时【shí】，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃【qì】去培养基后加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加入约【yuē】lml含血【xuè】清的培养基后加入【rù】冻存管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。悬浮【fú】细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，少量【liàng】保【bǎo】存【cún】上清液（防止细胞吸【xī】走)，加入【rù】部分新鲜培养基【jī】，加入到冻存管【guǎn】中，在冻【dòng】存【cún】管中加入1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们电联【lián】。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在【zài】的生物【wù】危害性，必须在二【èr】级生物安全台内操作，并【bìng】请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废液及【jí】接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
人胰腺癌细胞 (HPAC)细胞特性：
1)来源：人胰腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和【hé】保存【cún】：可选择干冰【bīng】运输及【jí】发【fā】送复【fù】苏存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运输，收到后【hòu】立【lì】即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续【xù】生【shēng】长【zhǎng】，传【chuán】代达到细胞生长【zhǎng】状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。