人微血管内皮细胞株（HMEC-1）

人微血管内皮细胞株(HMEC-1)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.内皮培【péi】养基（日0/1:5(^加6丨丨1001);添加10叩加1^6卩;10mM谷氨酰【xiān】胺【àn】；胎牛血【xuè】清，10%。
2.培【péi】养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细【xì】胞【bāo】：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入【rù】37°C水浴【yù】中【zhōng】（水面要低【dī】于冻存管盖部）摇晃解冻，移【yí】入事先准备好的含有4mL培【péi】养基的15ml离心管中【zhōng】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，加入lmL培 养基后吹匀【yún】。然后将【jiāng】所有细胞悬液【yè】移入含有5ml培养基的培【péi】养瓶中培养过夜。 第【dì】二【èr】天换液并检查【chá】细胞【bāo】密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人微血管内皮细胞株(HMEC-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清【qīng】，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-19次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶【píng】中【zhōng】，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-19分【fèn】钟【zhōng】，然后在显微镜【jìng】下【xià】观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部分【fèn】变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下【xià】培养瓶后加入【rù】3ml此细胞的培养基终【zhōng】止消化【huà】。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，加入【rù】lmL培【péi】养液后吹匀。移入到【dào】事【shì】先【xiān】准备好的含有5ml培养基的T-25培养【yǎng】瓶中或含【hán】有14ml培【péi】养基的T-75培养瓶中培养【yǎng】。

 
细胞冻【dòng】存：待细【xì】胞生长【zhǎng】状态良好时，可进行【háng】细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时【shí】，先要消化处理并进行细胞【bāo】计数。消化方【fāng】法按照细胞传【chuán】代方法【fǎ】的9-19步骤进行，后的【de】重悬液使【shǐ】用血清。悬浮细胞直接计数后【hòu】离心【xīn】，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为10%。加【jiā】入DMSO后迅速混匀【yún】，按【àn】每【měi】lml的数【shù】量分配到冻存管中。本公司按每个冻存【cún】管细胞数目大于【yú】1X106个细胞【bāo】冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请立【lì】即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所【suǒ】有【yǒu】动物细【xì】胞【bāo】均视为有潜在的【de】生物危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请【qǐng】注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器皿需

要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：血管
2)形态：内皮细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人微血管内皮细胞株(HMEC-1)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞生长状态【tài】，去掉封【fēng】口【kǒu】膜【mó】并将T25瓶置于37°C培【péi】养【yǎng】约【yuē】2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细【xì】胞长满（90%以上）请【qǐng】及时进行细胞传【chuán】代，传代培养用【yòng】6ml本公司【sī】附带的*培养基。
5.接到细胞次日【rì】，请检【jiǎn】查【chá】细胞【bāo】是否【fǒu】污染，若发【fā】现污染或疑似污染【rǎn】，请及时与我们取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。