人原髓细胞白血病细胞 （HL-60）

人原髓细胞白血病细胞 (HL-60)
细胞介绍：
HL-60是一株早幼粒细胞。外周血白细胞来自一位患【huàn】有【yǒu】急【jí】性粒-单核细胞白血病的36岁白人女【nǚ】性【xìng】。HL-60自发分化【huà】，丁【dīng】酸【suān】盐、佛波醇肉豆【dòu】蔻【kòu】酸(PMA,TPA)、 DMS0(1% to 1.5%)、放线菌素D和【hé】视黄【huáng】酸可以促进分【fèn】化。细胞表【biǎo】现出吞【tūn】噬活性【xìng】，并对趋化刺激有响应。致癌基因myc表达阳性。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备丨【shù】1/101/1培养基(丨1/101/1/)，80%;胎牛血清，20%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液【yè】氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在【zài】37°C水【shuǐ】浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中培【péi】养【yǎng】过夜（或【huò】将细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人原髓细胞白血病细胞 (HL-60)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清【qīng】，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在显微镜【jìng】下观察细【xì】胞【bāo】消化情况，若细胞大部【bù】分【fèn】变圆并脱【tuō】落，迅速【sù】拿回操【cāo】作【zuò】台，轻敲几下培养瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培【péi】养【yǎng】基，轻轻打匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的【de】含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中【zhōng】。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液【yè】，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀【yún】，将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半【bàn】数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液【yè】按1: 2到【dào】1: 3的比例【lì】分【fèn】到新【xīn】的【de】含【hán】8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。

 
细胞冻【dòng】存：待【dài】细胞生长状态良好【hǎo】时，可【kě】进行细胞【bāo】冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃去培【péi】养基后加入少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱【tuō】落后，加入约lml含血清【qīng】的培养基后 加入【rù】冻存【cún】管中【zhōng】，再【zài】添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟【zhōng】，少【shǎo】量保存上清【qīng】液（防止细胞吸【xī】走)，加入部分新【xīn】鲜培养基，加【jiā】入到冻存管中，在冻【dòng】存【cún】管【guǎn】中加【jiā】入1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰【bīng】己挥发【fā】干净、冻存【cún】管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们【men】电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在的【de】生【shēng】物危害【hài】性【xìng】，必须【xū】在二【èr】级生【shēng】物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：外周血；早幼粒细胞；急性粒一单核细胞白血病
2)形态：原粒细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人原髓细胞白血病细胞 (HL-60)运输和保【bǎo】存：可【kě】选择干冰【bīng】运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收【shōu】到后立即转入液氮【dàn】冻【dòng】存或直【zhí】接复苏；（2)存【cún】活细胞【bāo】

，收到后【hòu】应继续生长，传代达到细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时，再【zài】进行冻存。具体操作见细胞【bāo】培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。