人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）

人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)
细胞介绍：
该细胞属源【yuán】于正常肾的【de】近曲小【xiǎo】管细胞【bāo】，通过【guò】导入HPV-16 E6/E7基因【yīn】而获得永生化。将含有【yǒu】HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转【zhuǎn】录【lù】载体【tǐ】pLXSN 16 E6/E7转【zhuǎn】染外生 包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生【shēng】的再去感【gǎn】染兼嗜性包装细胞系PA317，后 将PA317产【chǎn】生的【de】颗粒导入正常的【de】肾皮质近曲【qǔ】小管细【xì】胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉【méi】素【sù】抗性，但未【wèi】用G418筛选转【zhuǎn】导克隆。Southern和FISH分析显【xiǎn】示HK-2 细胞来源于单克隆【lóng】。PCR检【jiǎn】测证实HK-2细胞基【jī】因组【zǔ】中含有E6/E7基因【yīn】。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备角化培养基（Defined K-SFM);角化【huà】因子（500X);添【tiān】 力口 5ng/mLEGF;双抗1%。
2. 培【péi】养【yǎng】条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细【xì】胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解【jiě】冻，加【jiā】 入【rù】4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过【guò】夜【yè】（或将细【xì】胞悬液【yè】加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2.细胞传代：如【rú】果【guǒ】细胞【bāo】密【mì】度达80%-90%，即可【kě】进行传代培养。
 
人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙【gài】、镁【měi】离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消化9-22分钟，然后在【zài】显微【wēi】镜下【xià】观【guān】察细胞消化情况，若细胞大部【bù】 分变【biàn】圆并脱落【luò】，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养【yǎng】瓶后加少量培养基终止消化【huà】。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将【jiāng】细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中或者瓶【píng】中。

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存【cún】时，弃去培养【yǎng】基后【hòu】，PBS清洗瓶底9-22次后加【jiā】入lml胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加【jiā】入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

1000RPM离心5分钟去掉【diào】上清【qīng】。用血清重悬浮【fú】，加【jiā】DMSO至终浓【nóng】度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数【shù】量分配到【dào】冻存管中，注【zhù】意冻存管做好标识。本公司按每个冻存【cún】管细胞【bāo】数目大于【yú】1X106个细胞冻存。将【jiāng】冻存管置【zhì】于【yú】程序降温盒中，放入-80度【dù】冰箱，至【zhì】少2个【gè】小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次【cì】拿取。

 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污染，请立【lì】即【jí】与我【wǒ】们电联。
所【suǒ】有动【dòng】物【wù】细【xì】胞【bāo】均视为有潜在的生【shēng】物【wù】危害性，必须在【zài】二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的【de】器皿要消毒灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：正常肾
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)运输【shū】和保存【cún】：可选【xuǎn】择干冰运输及【jí】发送复苏存活细胞方式：（1)干【gàn】冰运输，收【shōu】到后【hòu】立即转入液氮冻【dòng】存【cún】或直接复苏；（2)存活细胞

，收到后应继【jì】续生长，传代达到【dào】细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻【dòng】存。具【jù】体操作见细胞培【péi】养【yǎng】步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。