人胚肺成纤维细胞（HFL-1）

人胚肺成纤维细胞(HFL-1)
细胞介绍：
该细胞为稳定二倍体细胞。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培【péi】养基【jī】（F-12K: GIBCO)，80%;胎牛血清， 20%。
2.培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细胞【bāo】悬【xuán】液的冻存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中迅【xùn】速摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然【rán】后将【jiāng】所有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入【rù】约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
 
人胚肺成纤维细胞(HFL-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-20次。力【lì】口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中【zhōng】消化9-20分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细【xì】胞消【xiāo】化情况，若细【xì】胞大部 分变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将【jiāng】细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的【de】含【hán】8ml培养基的新皿中。

细胞【bāo】冻存：待细【xì】胞【bāo】生长状态良好时，可进【jìn】行细胞【bāo】冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃【qì】去培养基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的【de】培养基后加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破【pò】损及【jí】细胞有污【wū】染，请立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细【xì】胞【bāo】均视为有【yǒu】潜在的【de】生物危害性，必须在二级【jí】生【shēng】物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接【jiē】触过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺成纤维细胞(HFL-1)运输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的【de】2ml冻【dòng】存管【guǎn】发送存活细胞。收到细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件【jiàn】下，离心5min后，于洁【jié】净【jìng】操作台弃去上清，加【jiā】入推【tuī】荐使用的培养【yǎng】基后转移【yí】至l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶中培养，传代达到细【xì】胞生长状态良好时，再【zài】进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。