人肝癌细胞（Hep-3B）

人肝癌细胞(Hep-3B)
细胞介绍：
Hep-3B细胞建系于【yú】1979年，源自【zì】一【yī】位患有肝癌的【de】7岁黑人男童【tóng】。该细【xì】胞产生甲胎蛋白（alpha-fetoprotein)、乙肝表面抗【kàng】原（BHsAg)、白【bái】蛋白、巨球蛋白、a -抗胰蛋白（alphal-antitrypsin)、转铁蛋白、补体（C3)、C3活【huó】性载体，纤维【wéi】原等，具有广【guǎng】泛的研究【jiū】价值。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM 培养基(DMEM，GIBC0)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培【péi】养【yǎng】条件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加【jiā】入【rù】4mL培【péi】养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将【jiāng】细胞悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约【yuē】8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并检查细【xì】胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(Hep-3B)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培【péi】养上【shàng】清【qīng】，用不含钙【gài】、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-19次。力口2m丨【shù】消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-19分钟，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大【dà】部分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回【huí】操【cāo】作台【tái】，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加少量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻【qīng】轻打【dǎ】匀【yún】后【hòu】吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞【bāo】冻存：待细胞生长状态【tài】良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细【xì】胞冻存时，弃【qì】去培养基后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培养基【jī】后加入【rù】冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干【gàn】净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞【bāo】有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动物细【xì】胞均视为有潜在的生物【wù】危害【hài】性，必须在二级【jí】生物安【ān】全台内操作，并请注【zhù】意防【fáng】护，所有【yǒu】废液及【jí】接触过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(Hep-3B)运输和保存：使用含【hán】有【yǒu】胎【tāi】牛血清的2ml冻存管发送存【cún】活细胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推【tuī】荐使用【yòng】的【de】培养【yǎng】基后转移至l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶中培养，传代【dài】达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具【jù】体操作【zuò】见细胞培养步【bù】骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。