人肠上皮细胞（Henle-407）

人肠上皮细胞(Henle-407)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准【zhǔn】备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培【péi】养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3. 冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的【de】冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入【rù】4mL培养基【jī】混合【hé】均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养基【jī】后【hòu】吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬【xuán】液加入【rù】培【péi】养瓶中【zhōng】培【péi】养过夜（或将细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第二天换液并检 查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肠上皮细胞(Henle-407)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙【gài】、镁【měi】离子的【de】PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观【guān】察【chá】细胞【bāo】消化情况，若细胞大部 分【fèn】变圆并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基终止 消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻【qīng】轻打【dǎ】匀后吸出【chū】在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培养基的【de】新皿中【zhōng】或者 瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良【liáng】好时【shí】，可进行细【xì】胞冻存。贴壁细【xì】胞【bāo】冻【dòng】存时【shí】，弃去【qù】培【péi】养基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入【rù】约【yuē】lml含血清的培养基后【hòu】 加入冻存管中，再添加1〇 %DMSO后进行【háng】冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥【huī】发【fā】干【gàn】净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电联【lián】。
所有【yǒu】动物细胞均【jun1】视为有潜【qián】在的生物危害性，必【bì】须在二级【jí】生物安全台内【nèi】操作，并请【qǐng】注意防【fáng】护，所有废液及接触过此细胞的器皿【mǐn】需要灭【miè】菌后方能【néng】丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：肠道
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肠上皮细胞(Henle-407)运【yùn】输和保存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细【xì】胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下【xià】，离心5min后，于洁净【jìng】操【cāo】作台弃去【qù】上【shàng】清，加入推荐 使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传【chuán】代【dài】达到【dào】细胞生长状态良好【hǎo】时，再【zài】进行冻存。具【jù】体操作见细胞【bāo】培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。