人胚肺成纤维细胞（HELF）

人胚肺成纤维细胞(HELF)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】迅【xùn】速放入【rù】37°C水浴中（水面【miàn】要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管【guǎn】中混【hún】合均匀。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，加【jiā】入lmL培【péi】 养基后【hòu】吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬【xuán】液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第【dì】二天换液【yè】并【bìng】检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胚肺成纤维细胞(HELF)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含【hán】钙【gài】、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下【xià】观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部分【fèn】变圆【yuán】并脱【tuō】落【luò】，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细【xì】胞【bāo】的 培养基终止【zhǐ】消化。轻轻吹打后【hòu】吸出【chū】，移入15ml离心【xīn】管【guǎn】中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟【zhōng】， 弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。移入到事先准备好的含有5ml培【péi】养【yǎng】基的【de】T-25培养瓶中或含有14ml培【péi】养【yǎng】 基的T-75培养【yǎng】瓶【píng】中培养。
 
细胞冻【dòng】存【cún】：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细【xì】胞冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，先【xiān】要消【xiāo】化处理并【bìng】进行细胞计【jì】数。消【xiāo】化方法按照细胞传【chuán】代方法的9-22步【bù】骤进行【háng】， 后的重悬液使用血【xuè】清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清【qīng】重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅【xùn】速混匀，按每lml的数量【liàng】分配到冻存管【guǎn】中。本公【gōng】司按每个【gè】冻存管细胞数目【mù】大于1X106个【gè】细【xì】胞【bāo】冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们【men】电【diàn】联。
所有动【dòng】物细【xì】胞【bāo】均视为有潜在的生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生物安全台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废【fèi】液及接触【chù】过【guò】此细胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能【néng】丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：成纤维细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在【zài】显微镜下【xià】确认细【xì】胞生长状态，去【qù】掉封口【kǒu】膜并将T25瓶置于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长【zhǎng】满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培【péi】养用6ml本公司【sī】附带的*培养【yǎng】基【jī】。
5.接到细胞次日，请检查【chá】细【xì】胞是否污染，若发现污【wū】染或疑似污染，请【qǐng】及时与【yǔ】我们【men】取得电联。
细胞用途：仅供使用。