人胚胎肾细胞（HEK-293T）

人胚胎肾细胞(HEK-293T)
细胞介绍：
细胞持续表达SV40抗原，该【gāi】细胞常用【yòng】于转【zhuǎn】染【rǎn】实验，转染效率较【jiào】高。（转【zhuǎn】染一般以 50%密度铺板，待细胞刚刚贴到皿壁上【shàng】后（一【yī】般9-22小【xiǎo】时），即可【kě】进行转染【rǎn】操作)
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培【péi】养基【jī】(DMEM，GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的【de】冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去【qù】上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀【yún】。然【rán】后将所有【yǒu】细胞悬【xuán】液加入培【péi】养瓶中培【péi】养过夜（或将细胞【bāo】悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基【jī】，培养过夜）。第二【èr】天【tiān】换液并检【jiǎn】查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胚胎肾细胞(HEK-293T)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙【gài】、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培【péi】养【yǎng】箱中消化9-22分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜下观察细胞消化情况，若【ruò】细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操【cāo】作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶【píng】后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬【xuán】液【yè】按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培养【yǎng】基的【de】新皿【mǐn】中或【huò】者 瓶【píng】中。
 
细胞冻存：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃去培养【yǎng】基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后【hòu】，加入约lml含血清的培养基后【hòu】 加入冻存【cún】管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即【jí】与我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜【qián】在的生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生【shēng】物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有【yǒu】废液【yè】及接触过此细胞的器【qì】皿【mǐn】需要【yào】灭菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：人胚胎肾脏
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人胚胎肾细胞(HEK-293T)运输和【hé】保存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件【jiàn】下，离心5min后【hòu】，于洁净操作【zuò】台【tái】弃去上清，加入推【tuī】荐使【shǐ】用的培养基【jī】后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养，传代达到【dào】细【xì】胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好【hǎo】时【shí】，再【zài】进行冻存。具体操作见细胞培养【yǎng】步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。