人子宫内膜腺癌细胞（HEC-1-B）

人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)
细胞介绍：
该细胞是【shì】H. Kuramoto 1968年【nián】分离的HEC-1-A细胞亚株【zhū】。不同于HEC-A-1的是：该亚【yà】株在培养第【dì】135天到190天【tiān】之间表现出【chū】稳定的生长周期，且重现扁平，与亲【qīn】本【běn】细胞系相比更具铺路【lù】石式样。此外主要【yào】染色体组【zǔ】是亲本细胞的两倍。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 培养【yǎng】基(MEM, GIBC0，添加 NaHC031.5g八【bā】，丙 酮酸钠【nà】O.llg八)。
2. 培【péi】养【yǎng】条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存管迅速【sù】放入37°C水浴中（水面【miàn】要低于冻存管盖部）摇晃解【jiě】冻，移入事【shì】先准【zhǔn】备好的含有4mL培养【yǎng】基的【de】15ml离心管中混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，加入lmL培【péi】 养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液移入含有5ml培养基的【de】培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】过夜。第二天换液【yè】并检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)对于贴【tiē】壁细胞，传代可参【cān】考以下方法：弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞【bāo】9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化【huà】9-22分钟，然后【hòu】在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若【ruò】细胞大部分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操【cāo】作台，轻敲【qiāo】几下【xià】培养瓶后加【jiā】入3ml此细胞的培养基终止消【xiāo】化。轻轻吹打【dǎ】后吸出【chū】，移入【rù】15ml离心管中【zhōng】，在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，加入lmL培【péi】养液后【hòu】吹匀。移入到【dào】事【shì】先【xiān】准备好【hǎo】的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞冻存：待细胞【bāo】生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存【cún】时【shí】，先要消化【huà】处理并进行细【xì】胞计数。消化方法按照【zhào】细胞传代方法的9-22步骤进【jìn】行，后【hòu】的【de】重悬液使用血【xuè】清【qīng】。悬浮细胞直【zhí】接计数【shù】后离心，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为【wéi】10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的【de】数量分配到冻存管中【zhōng】。本公司按每个冻存【cún】管【guǎn】细胞【bāo】数目大于1X106个细【xì】胞冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污【wū】染，请【qǐng】立【lì】即【jí】与我们电联。
所【suǒ】有【yǒu】动物细胞均视为有潜在【zài】的生【shēng】物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台【tái】内操作，并请注意【yì】防护，所【suǒ】有废液及接触过【guò】此细胞【bāo】的器皿需【xū】要【yào】灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：子宫内膜腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-B)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确【què】认细【xì】胞生【shēng】长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长【zhǎng】满（90%以【yǐ】上）请及时【shí】进行细胞传代【dài】，传代【dài】培【péi】养用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若【ruò】发现污染【rǎn】或【huò】疑似污【wū】染，请及时与【yǔ】我【wǒ】们取得电联。
细胞用途：仅供使用。