人永生化表皮细胞（HaCat）

人永生化表皮细胞(HaCat)
细胞介绍
该细胞源自一位 62 岁患有【yǒu】黑色素瘤【liú】男性的【de】病灶外围正常皮肤，角蛋白、角【jiǎo】化【huà】细胞交联【lián】外膜蛋白、中间【jiān】丝相关蛋白阳【yáng】性【xìng】。
 
细胞特性
1.  来源：正常表皮细胞
2.  形态 ：上皮细胞样，贴壁生长
3.  含量：>1x10 6 个/mL
4.  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5.  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运输和保存：使用【yòng】含【hán】有胎牛血清的 2ml 冻存管发送存【cún】活细胞。收【shōu】到细胞【bāo】后，可在 1000RPM，常温条件下，离心【xīn】 5min 后【hòu】，于洁【jié】净【jìng】操【cāo】作【zuò】台弃【qì】去上清【qīng】，加入推【tuī】荐【jiàn】使用【yòng】的【de】培养基【jī】后转移至10cm 培养皿或者 T25 培养瓶中培【péi】养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
人永生化表皮细胞(HaCat)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）准备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，85%；北美胎牛【niú】血【xuè】清(United States，GIBCO)，15%。

2）培【péi】养【yǎng】条件： 气相【xiàng】：空气，95%；二【èr】氧化碳，5%。 温度：37 摄氏【shì】度，培养【yǎng】箱湿度为【wéi】 70%-80%。
3）冻存液【yè】：90%*培养【yǎng】基【jī】，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏细胞【bāo】：将含【hán】有 1mL 细胞【bāo】悬【xuán】液的冻存管在【zài】 37℃水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加【jiā】入 4mL 培养【yǎng】基混合均匀。在 1000RPM 条【tiáo】件【jiàn】下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液【yè】加入培养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加【jiā】入【rù】约 8ml 培养基，培养过夜【yè】）。第【dì】二天换液并检查【chá】细【xì】胞密度。
2） 细胞【bāo】传代：如果细胞【bāo】密【mì】度达 80%-90%，即可【kě】进行传代培养。对于贴壁【bì】细胞，传代可【kě】参考以下【xià】方法：
1. 弃去培【péi】养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的 PBS 润【rùn】洗细胞 9-23 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置【zhì】于 37℃培【péi】养箱中【zhōng】消化 9-23 分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若【ruò】细胞【bāo】大部分变圆并脱落【luò】，迅速拿回【huí】操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培养【yǎng】基【jī】终【zhōng】止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻【qīng】轻打匀后【hòu】吸出，在 1000RPM 条件下【xià】离心 4 分钟，弃去上清液【yè】，补加【jiā】 1-2mL 培养液后吹【chuī】匀。
4. 将细【xì】胞悬液【yè】按 1：2 到 1：5 的比例分到新的【de】含 8ml 培养基【jī】的【de】新皿中或者瓶中。
3）细【xì】胞冻存【cún】：待细胞生长状态良好时，可进行细【xì】胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约【yuē】 1ml 含血清的培【péi】养【yǎng】基后加入冻存管中【zhōng】，再添加【jiā】 10%DMSO 后【hòu】进行【háng】冻存。
 
人永生化表皮细胞(HaCat)注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥【huī】发【fā】干【gàn】净【jìng】、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
2. 所【suǒ】有动物细【xì】胞均视【shì】为有潜【qián】在【zài】的【de】生物危害性，必须在二【èr】级【jí】生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液及【jí】接触过此细胞的器皿需【xū】要灭【miè】菌后方能丢弃。