人膀胱癌细胞 （EJ）

人膀胱癌细胞 (EJ)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPMI-1640培养基，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄【shè】氏度【dù】，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇晃解【jiě】冻，加【jiā】 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基【jī】后【hòu】吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加【jiā】入培【péi】养瓶中培养过夜（或将 细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培【péi】养过【guò】夜）。第二天换液并检查细胞【bāo】密【mì】度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膀胱癌细胞 (EJ)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-23次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶【píng】中，置于【yú】37°C培【péi】养箱【xiāng】中消化9-23分【fèn】钟，然后在显微镜【jìng】下观察细【xì】胞消化情【qíng】况【kuàng】，若细胞大部分【fèn】变【biàn】圆并脱落，迅速拿回【huí】操【cāo】作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后加少量培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或者瓶【píng】中【zhōng】。
 
3)细胞【bāo】冻【dòng】存：待【dài】细胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻【dòng】存。贴壁细【xì】胞冻存时，弃去培养基后【hòu】加入少量胰酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约【yuē】lml含血清的【de】培【péi】养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。

注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发干【gàn】净、冻【dòng】存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立【lì】即与【yǔ】我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全【quán】台内操作【zuò】，并请注【zhù】意防【fáng】护，所有【yǒu】废液及【jí】接【jiē】触过【guò】此细【xì】胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：膀胱癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膀胱癌细胞 (EJ)运【yùn】输和【hé】保存：使用【yòng】含有胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送存活细【xì】胞。收【shōu】到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温条件下，离心【xīn】5min后【hòu】，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者【zhě】T25培养瓶中培养，传代达到细【xì】胞生长状【zhuàng】态【tài】良好时，再【zài】进行冻存。具体【tǐ】操作【zuò】见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。