人非小细胞肺癌细胞（HCC827）

人非小细胞肺癌细胞(HCC827)
细胞介绍
这【zhè】株细胞建于 1994 年三月。这株肺腺癌在 EGFR 酪【lào】氨【ān】酸【suān】激酶区域【yù】有一个获得性突变【biàn】(E746-A750 缺失【shī】)。患者在【zài】 25 岁【suì】到 26 岁时每个月抽【chōu】 1 包烟。在诊断前 12 年不再抽烟【yān】。
 
细胞特性
1.  来源：肺腺癌
2.  形态 ：上皮细胞样
3.  含量：>1x10 6 个/mL
4.  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5.  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运【yùn】输【shū】和保【bǎo】存：使用含有胎牛【niú】血清的 2ml 冻存【cún】管【guǎn】发【fā】送存活细胞【bāo】。收【shōu】到细胞【bāo】后，可在 1000RPM，常温条件下，离心 5min 后【hòu】，于【yú】洁净操作台【tái】弃去上清，加入推【tuī】荐使用的培养【yǎng】基【jī】后转移10cm 培养皿或【huò】者 T25 培【péi】养【yǎng】瓶中培养，传【chuán】代达到细胞生长【zhǎng】状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
人非小细胞肺癌细胞(HCC827)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）准备RPMI-1640培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO,添【tiān】加NaHCO 3 1.5g/L,D-葡萄【táo】糖【táng】 2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条【tiáo】件： 气相：空气，95%；二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。 温度：37 摄【shè】氏度，培养箱湿度【dù】为 70%-80%。
3）冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO，现【xiàn】用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
 
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏细【xì】胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻【dòng】存管在 37℃水浴【yù】中迅速摇晃解冻【dòng】，加入 4mL 培养基混【hún】合【hé】均匀【yún】。在【zài】 1000RPM 条件下【xià】离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培【péi】养基后吹匀【yún】。然后将所【suǒ】有细胞【bāo】悬液【yè】加入培养【yǎng】瓶【píng】中培夜（或将细胞悬液加入【rù】 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基【jī】，培养过夜【yè】）。第二天换液并检查细胞密【mì】度。
2） 细【xì】胞传【chuán】代：如果细胞密度达 80%-90%，即可【kě】进【jìn】行传代【dài】培养。对于贴【tiē】壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培【péi】养上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁离子的 PBS 润洗细胞【bāo】 9-23 次【cì】。
2. 加 2ml 消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化【huà】 9-23 分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜【jìng】下观察细胞消化情况，若【ruò】细胞大部分【fèn】变【biàn】圆【yuán】并脱落【luò】，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后【hòu】加少量培【péi】养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶【píng】补加培养【yǎng】基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补【bǔ】加 1-2mL 培养液【yè】后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 到【dào】 1：5 的【de】比例分到新的含【hán】 8ml 培养基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶【píng】中。
3）细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进【jìn】行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞【bāo】冻存时【shí】，弃去培养基【jī】后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约 1ml 含血清的培养基后加【jiā】入【rù】冻存管中【zhōng】，再【zài】添加【jiā】 10%DMSO 后进【jìn】行冻存。
 
人非小细胞肺癌细胞(HCC827)注意事项：
1. 收【shōu】到【dào】细【xì】胞后，若发现干【gàn】冰已挥发【fā】干净、冻存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立【lì】即与我们电联。
2. 所有动物细胞均【jun1】视【shì】为有【yǒu】潜在的【de】生物危害性，必须【xū】在二级【jí】生物安全台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废【fèi】液及接触过此细胞【bāo】的【de】器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。