人食管癌细胞（EC-9706）

人食管癌细胞(EC-9706)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细【xì】胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的【de】冻【dòng】存管在【zài】37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然【rán】后将所有细胞悬液加【jiā】入培养【yǎng】瓶中培养过【guò】夜（或将 细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜【yè】）。第二天换液并检【jiǎn】 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人食管癌细胞(EC-9706)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-23次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消【xiāo】化9-23分【fèn】钟，然【rán】后在显微镜【jìng】下观察细胞消化【huà】情况，若细胞大部【bù】 分【fèn】变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操【cāo】作台【tái】，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终止 消化【huà】。按【àn】6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻【qīng】打匀【yún】后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后【hòu】吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的【de】含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存【cún】：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时【shí】，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后【hòu】，加入约【yuē】lml含血清的【de】培养【yǎng】基【jī】后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发【fā】现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及【jí】细胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞均【jun1】视为【wéi】有【yǒu】潜在【zài】的生物【wù】危害性，必【bì】须在【zài】二级生物安全【quán】台【tái】内操作，并请注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。
 
人食管癌细胞(EC-9706)细胞特性：
1)来源：食管癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运【yùn】输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送【sòng】存活细胞。收到细胞后， 可在1000RPM，常【cháng】温条【tiáo】件【jiàn】下，离【lí】心5min后，于洁净【jìng】操作台【tái】弃去上清，加入推荐使用的培【péi】养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者【zhě】T25培养瓶中培【péi】养，传【chuán】代达【dá】到细胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时，再进行冻【dòng】存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。