人胆管癌细胞（HuH28）

人胆管癌细胞(HuH28)
细胞特性：
1)来源：胆管癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确认细胞【bāo】生长状态，去【qù】掉【diào】封【fēng】口膜【mó】并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及【jí】时进行细胞【bāo】传【chuán】代，传代【dài】培养用6ml本公司附【fù】带的*培养基。
5.接到【dào】细胞【bāo】次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染【rǎn】，请及时【shí】与【yǔ】我们取【qǔ】得电联。
 
人胆管癌细胞(HuH28)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，90%;北美【měi】胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37°C，培养箱【xiāng】湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有lmL细【xì】胞悬液的【de】冻存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于【yú】冻存管【guǎn】盖【gài】部）摇晃解冻，移【yí】入事先准备好的含【hán】有4mL培【péi】养基的15ml离【lí】心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液【yè】，加入lmL培养基后【hòu】匀【yún】。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培【péi】养基的【de】培养瓶中培养【yǎng】过夜【yè】。第二天换液并检【jiǎn】查细胞密度。
细【xì】胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养【yǎng】。对于【yú】贴壁细胞，传【chuán】代可参考【kǎo】以下【xià】方【fāng】法：弃去培【péi】养【yǎng】上清，用【yòng】不【bú】含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-23次。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-23分钟，然后【hòu】在显微镜下观【guān】察【chá】细胞消化情况，若【ruò】细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅【xùn】速【sù】拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加【jiā】入3ml此细胞的培养基终止消【xiāo】化。
轻轻吹【chuī】打【dǎ】后吸出，移入15ml离心管中，在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清液，加【jiā】入lmL培【péi】养液【yè】后吹匀。移入到事【shì】先准【zhǔn】备好的含有5ml培【péi】养【yǎng】基的【de】T-25培【péi】养瓶中或含【hán】有14ml培养基的T-75培养瓶中【zhōng】培养。细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行【háng】细【xì】胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先要【yào】消化处理并进行细胞计数【shù】。消化方法按照细胞传代方法的9-23步骤进行【háng】，后的重【chóng】悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮【fú】，加DMS至终【zhōng】浓【nóng】度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的【de】数【shù】量分【fèn】配到冻【dòng】存【cún】管中。本公司【sī】按每【měi】个冻存管细胞数目大【dà】于1X106个细胞冻存。
 
人胆管癌细胞(HuH28)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱落、破损及细【xì】胞有污染，请【qǐng】立【lì】即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必【bì】须在二级生物安全【quán】台内【nèi】操【cāo】作，并【bìng】请【qǐng】注意防护，所有废液及接触过【guò】此细胞的器皿需要灭菌【jun1】后方【fāng】能【néng】丢弃【qì】。