人脐静脉融合细胞（EA.hy926）

人脐静脉融合细胞(EA.hy926)
细胞介绍：
在PEG胁迫【pò】下，将原代培【péi】养的人脐静脉细胞【bāo】与抗硫鸟【niǎo】嘌呤的【de】A549克隆株融合， 构建【jiàn】了人脐静脉【mò】细【xì】胞株,EA.hy926。融合子【zǐ】在HAT培【péi】养基【jī】上生长并以八因子相关抗原【yuán】筛选。EA.hy926己经【jīng】过100次以上的群体【tǐ】倍增【zēng】(PDLs)。电镜照片【piàn】显【xiǎn】示 Weibel-Palade小【xiǎo】体的细胞【bāo】质分【fèn】布以及组【zǔ】织【zhī】特异【yì】性的细胞器，分化的内皮细胞特性 如血管，体内平衡/血栓形【xíng】成，血压【yā】及炎症反应。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培【péi】养【yǎng】基(DMEM-H，GIBCO添加 NaHC031.5g/L)， 90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液【yè】体培养基：GIBCO)。
2. 培【péi】养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度【dù】，培养箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配【pèi】。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴【yù】中【zhōng】迅速摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬液【yè】加入培养瓶中培养过【guò】夜（或将【jiāng】 细胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入【rù】约8ml培【péi】养基【jī】，培养过【guò】夜）。第【dì】二天【tiān】换液并【bìng】检查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人脐静脉融合细胞(EA.hy926)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。力口2m丨【shù】消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-23分钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若细【xì】胞大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作【zuò】台，轻【qīng】敲几下培养【yǎng】瓶后加少【shǎo】量培养【yǎng】基终【zhōng】止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻打匀【yún】后吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的【de】新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可【kě】进【jìn】行细胞【bāo】冻存。贴壁【bì】细胞冻存时【shí】，弃去【qù】培养【yǎng】基后加【jiā】入【rù】少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的【de】培养基后加入【rù】冻存【cún】管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱【tuō】落【luò】、破【pò】损及细胞有污染【rǎn】，请立【lì】即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视为【wéi】有【yǒu】潜【qián】在的生物危害性，必【bì】须在二【èr】级生物安全【quán】台【tái】内操作，并请【qǐng】注【zhù】意防护，所有废液及接【jiē】触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：静脉内皮细胞与A549细胞株融合
2)形态：梭形，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人脐静脉融合细胞(EA.hy926)运输【shū】和保存【cún】：使【shǐ】用【yòng】含有胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送存【cún】活细胞【bāo】。收到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温条件【jiàn】下，离心5min后，于洁净操作台【tái】弃【qì】去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达到细胞生长状态良【liáng】好【hǎo】时，再进行【háng】冻存。具【jù】体操作见细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。