人非小细胞肺癌细胞（NCI-H358）

人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)
细胞介绍：
1981年从一位开始【shǐ】化【huà】疗之前【qián】的患【huàn】者的肿瘤组织中分离建株。超微结构研究表明细胞质中有【yǒu】Clara细胞的特征结【jié】构。细胞【bāo】表达主要的肺表面结合【hé】蛋白SP-A的蛋【dàn】白和RNA，不【bú】表达SP-B和SP-C。
 
细胞特性
1)来源：细支气管及肺泡癌;非小细胞肺癌;肺;细支气管;肺泡
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：使用含【hán】有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送存活【huó】细胞。收到细胞后【hòu】，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃【qì】去上清，加入推荐【jiàn】使用的培养基后【hòu】转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿或【huò】者T25培【péi】养【yǎng】瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞生【shēng】长状【zhuàng】态良【liáng】好时，再进行【háng】冻存。具【jù】体操作见【jiàn】细胞【bāo】培养【yǎng】步骤。
 
人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO,)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细胞【bāo】悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基混合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培养基【jī】后吹匀【yún】。然后将所有细胞悬液加入培养瓶【píng】中培养【yǎng】过夜（或将
细【xì】胞【bāo】悬【xuán】液加入l〇cm皿【mǐn】中，加【jiā】入【rù】约8ml培养基【jī】，培养过夜【yè】）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-23次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培养箱中消【xiāo】化【huà】9-23分钟，然【rán】后在显微镜下观【guān】察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并【bìng】脱落，迅速拿操【cāo】作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少【shǎo】量【liàng】培养【yǎng】基终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液后吹【chuī】匀。将细【xì】胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或【huò】者瓶中。细胞冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去【qù】培养【yǎng】基后加入少量【liàng】胰酶，细胞【bāo】变圆脱【tuō】落后，加入约【yuē】lml含血清的培养【yǎng】基后加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存【cún】。
 
人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在的【de】生【shēng】物危害性【xìng】，必须在二【èr】级【jí】生物安全台内操作，并请注意防【fáng】护，所【suǒ】有【yǒu】废液及接触过此细胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。