人小细胞肺癌细胞（NCI-H446）

人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)
细胞介绍：
NCI-H446细【xì】胞【bāo】株从一【yī】位小细胞肺癌【ái】患者【zhě】的【de】胸水中建立。细胞的原始形态并不具有小细胞肺癌特征【zhēng】。这个细胞株是小细胞肺癌【ái】的【de】生化和形【xíng】态【tài】学上的变种，表达神经元*的【de】烯醇酶和脑部肌酸【suān】激酶同功酶。左旋多巴脱羧酶、蚕素、抗利【lì】尿激素、催产素或胃泌【mì】激【jī】素释【shì】放肽【tài】未达到可检测水【shuǐ】平。C-myc DNA序列扩增约20倍，c-mycRNA比正常细胞增【zēng】加15倍。初传代培养基【jī】用添加【jiā】0.005mg/ml胰【yí】岛素,0.01 mg/ml铁传递【dì】蛋白，10 nM 17-beta-雌【cí】二【èr】醇, 胎牛血清,5%。
 
细胞特性
1)来源：肺；转移灶：肋膜渗出癌；小细胞肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和【hé】保存：使【shǐ】用含有胎牛血清【qīng】的2ml冻存管【guǎn】发【fā】送【sòng】存活细胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁【jié】净操作台弃去上清，加【jiā】入推荐使用的【de】培【péi】养基【jī】后转移至l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养瓶中培养，传代达到【dào】细胞生长状态良好时，再【zài】进【jìn】行冻存。具【jù】体操作见细胞培【péi】养步骤。
 
人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;北【běi】美胎牛血清(United States，GIBCO，货号【hào】 16000-044)，10%。
2. 培养【yǎng】条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培【péi】养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇【yáo】晃解【jiě】冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液【yè】，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞【bāo】悬液加入培养瓶【píng】中培养过夜【yè】（或将细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入【rù】约8ml培养【yǎng】基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并检查【chá】细胞密度。
 
细胞传代【dài】：如果细胞密【mì】度达80%-90%，即可进行传代培【péi】养。对【duì】于贴壁细胞，传代可参考以下【xià】方法：弃去培【péi】养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞【bāo】9-23次。
力口【kǒu】 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培【péi】养【yǎng】箱中消化9-23分钟，然后在显微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部【bù】分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻【qīng】敲【qiāo】几下培【péi】养瓶后加少【shǎo】量【liàng】培养基终止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出【chū】，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新【xīn】的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或者瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时【shí】，可【kě】进行细【xì】胞【bāo】冻【dòng】存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去培养基后加入【rù】少量【liàng】胰酶，细胞【bāo】变圆脱落【luò】后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破【pò】损及细【xì】胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二【èr】级生物安全台内【nèi】操作，并请注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触【chù】过此细【xì】胞的器皿需要灭菌【jun1】后方能丢【diū】弃。