人大细胞肺癌细胞（NCI-H460）

人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)
细胞介绍：
该细胞1982年【nián】由A.F. Gazdar建系【xì】，源【yuán】自【zì】一位患有大细胞肺癌的男性【xìng】的胸腔积液【yè】。该细胞角【jiǎo】蛋白、波形蛋白阳【yáng】性。
 
细胞特性
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶【píng】或者【zhě】lmL冻【dòng】存管【guǎn】包装运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收到细胞后【hòu】，可在【zài】1000RPM，常温条件【jiàn】下，离【lí】心5min后，于洁净操作【zuò】台【tái】弃去上清，加【jiā】入推荐使用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培【péi】养瓶【píng】中培养，传代【dài】达【dá】到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存【cún】。具体操作见【jiàn】细胞培养步【bù】骤。
 
细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO, 添加 NaHC031.5g八,D-葡萄【táo】糖2.5g八【bā】，丙酮【tóng】酸钠O.llg八)，90%;胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培【péi】养基混【hún】合均匀【yún】。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬【xuán】液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培【péi】养基，培养过夜）。第【dì】二天换液并检查细胞密度。细【xì】胞传代：如果细胞密度达【dá】80%-90%，即可【kě】进【jìn】行传代培养。
 
人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润【rùn】洗细【xì】胞9-23次。力口【kǒu】 2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-23分钟，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜【jìng】下观察【chá】细胞消化情况，若【ruò】细胞大部分变【biàn】圆【yuán】并脱落【luò】，迅速拿操【cāo】作台，轻【qīng】敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。
按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻【qīng】打【dǎ】匀后吸【xī】出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例【lì】分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或【huò】者【zhě】瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养【yǎng】基【jī】后加【jiā】入少【shǎo】量胰酶【méi】，细【xì】胞变圆脱落后，加【jiā】入约lml含血清的培【péi】养基【jī】后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与我们电联【lián】。
所有动物细胞均视为有【yǒu】潜【qián】在的【de】生物危害性，必【bì】须在二【èr】级生【shēng】物安全台内操作，并请【qǐng】注意防【fáng】护，所有废液及接触过此【cǐ】细胞的器皿需【xū】要灭菌后方【fāng】能丢弃。