人非小细胞 肺癌细胞（NCI-H526）

人非小细胞 肺癌细胞(NCI-H526)
细胞介绍：
该细胞来源于【yú】高加索白【bái】人男性【xìng】，提取于病【bìng】人在接受治疗前的骨髓转移。
 
细胞特性：
1)来源：骨髓转移
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含有胎牛血【xuè】清的【de】2ml冻存管发送存活细【xì】胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常【cháng】温【wēn】条件【jiàn】下，离心5min后，于【yú】洁净【jìng】操【cāo】作台弃去上清，加入推【tuī】荐使【shǐ】用的培养基后转移【yí】至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达【dá】细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。

人非小细胞 肺癌细胞(NCI-H526)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙【bǐng】酮【tóng】酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培【péi】养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培【péi】养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】基后吹匀【yún】。然后将所有【yǒu】细胞悬液【yè】加入【rù】培【péi】养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细胞悬【xuán】液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天换液并检【jiǎn】查细胞密度。
 
细胞传代：如【rú】果细胞密度【dù】达80%-90%，即可进行传【chuán】代培养。对于【yú】贴壁细胞，传代可【kě】参考以下方法：弃【qì】去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗细胞9-23次力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养【yǎng】箱【xiāng】中消【xiāo】化9-23分钟【zhōng】，然后在显微镜下【xià】观【guān】察细胞消化【huà】情况，若细胞大部【bù】分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加【jiā】少量培养基【jī】终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养【yǎng】基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培【péi】养基的【de】新皿中或者瓶中【zhōng】。
 
细胞冻存【cún】：待细胞生长状态良好时【shí】，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培【péi】养基后【hòu】加入少【shǎo】量胰酶，细【xì】胞变圆【yuán】脱落后【hòu】，加入约lml含【hán】血清的【de】培养基后加【jiā】入冻存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻存【cún】。
 
人非小细胞 肺癌细胞(NCI-H526)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电联【lián】。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均视为有潜在【zài】的【de】生物危害性，必须在二【èr】级生物安【ān】全台内操作，并请【qǐng】注【zhù】意防护【hù】，所有【yǒu】废液及接触过此细【xì】胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。