人非小细胞肺癌 细胞（NCI-H1299）

人非小细胞肺癌 细胞(NCI-H1299)
细胞介绍：
这株细胞来源【yuán】于一个【gè】淋巴【bā】结转移患者。细胞【bāo】均一性的部分缺失【shī】P53蛋白，并缺少p53蛋白表达【dá】。细【xì】胞【bāo】可以合成O.lpmol/毫克蛋【dàn】白的NMB蛋白，而不合成促胃液释放【fàng】肽(GRP)。
 
细胞特性
1)来源：肺癌；非小细胞肺癌；转移灶；淋巴结
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜下确【què】认细胞生长状【zhuàng】态，去掉封【fēng】口膜【mó】并将T25瓶置于【yú】37°C培养【yǎng】约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如【rú】果细胞长满（90%以上）请及时【shí】进【jìn】行细胞传代，传【chuán】代【dài】培【péi】养用6ml本公司附【fù】带【dài】的*培养基。
5.接【jiē】到【dào】细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染【rǎn】或疑似【sì】污染，请及时与【yǔ】我们取【qǔ】得电【diàn】联。
 
细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管迅速放入【rù】37°C水浴中【zhōng】（水面要低于冻存管【guǎn】盖部）摇【yáo】晃解冻，移入事先准【zhǔn】备好【hǎo】的含【hán】有4mL培养【yǎng】基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清【qīng】液，加【jiā】入lmL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液移【yí】入含有【yǒu】5ml培养基【jī】的培养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜。第二天换液并检【jiǎn】查【chá】细胞密度【dù】。
 
人非小细胞肺癌 细胞(NCI-H1299)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培【péi】养箱中消化9-23分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅速【sù】拿回【huí】操作台【tái】，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加入3ml此【cǐ】细胞的培【péi】养【yǎng】基终【zhōng】止消化。
轻轻吹打【dǎ】后吸出【chū】，移入【rù】15ml离【lí】心【xīn】管中，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃【qì】去上清液，加入lmL培养液后吹匀。移【yí】入到事先准备【bèi】好的【de】含有5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中或含有14ml培养
基的T-75培养瓶中培养。
 
细【xì】胞冻存：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状态【tài】良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，先要【yào】消化处理并进行细胞计数【shù】。消化方法按照细胞传代方【fāng】法的9-23步骤进行，后的重【chóng】悬【xuán】液【yè】使用血清。悬【xuán】浮细胞直接计数后离心，用血清重【chóng】悬【xuán】浮，加DMSO至终浓度为10%。加【jiā】入【rù】DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量分配【pèi】到冻存【cún】管中。本公司按每个冻【dòng】存管细胞数目大于1X106个细胞【bāo】冻存。
 
人非小细胞肺癌 细胞(NCI-H1299)注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶【píng】盖脱【tuō】落、破损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物【wù】细【xì】胞【bāo】均视为有潜【qián】在【zài】的生物危【wēi】害性，必须在二【èr】级【jí】生物安全台内操作【zuò】，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。