人急性淋巴细胞白血病细胞 （CEM/C1）

人急性淋巴细胞白血病细胞 (CEM/C1)
细胞介绍：
CEM/C1是人【rén】T细胞白血病细胞株CCRF-CEM具有喜树【shù】碱抗性的衍生株。1991年细胞株【zhū】选择【zé】并亚克隆了【le】对CPT的抗性。细胞表现出【chū】对【duì】CPT类【lèi】似物水溶【róng】性的【de】托泊替康和非水溶性的9-氨基丁及10,11-亚甲二氧基丁具有交叉抗【kàng】性【xìng】。〔日【rì】1/1/(：1细【xì】胞【bāo】对CPT的敏感性较母【mǔ】系CEM细胞低31倍。CEM/C1细胞表现【xiàn】非典型的多【duō】药抗性和转换拓补【bǔ】异构酶【méi】催化活性。对CPT的抗性维【wéi】持6个月【yuè】以上。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄【táo】糖2.5g八，丙酮酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培【péi】养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬【xuán】液【yè】的冻存管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后【hòu】吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬【xuán】液【yè】加入培养瓶【píng】中培养过【guò】夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第【dì】二天换液并【bìng】检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人急性淋巴细胞白血病细胞 (CEM/C1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清【qīng】，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。力【lì】口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培【péi】养【yǎng】箱中消化9-23分钟，然后在显微【wēi】镜下观察细【xì】胞消化【huà】情况，若细胞【bāo】大部 分变圆并脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加少量培养基终【zhōng】止 消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液【yè】后【hòu】吹匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例【lì】分到新的含【hán】8ml培养基的【de】新皿中或者瓶中【zhōng】。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细【xì】胞，1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后【hòu】吹匀，将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的【de】含【hán】8ml培养基的新皿中或者瓶中【zhōng】。
方法二：可选择【zé】半数换液方【fāng】式，弃去【qù】半数培养【yǎng】基后，将剩余细胞悬起，将细 胞悬【xuán】液按1: 2到1: 3的比例分到【dào】新【xīn】的【de】含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿中【zhōng】或者瓶中。
细【xì】胞冻存【cún】：待【dài】细【xì】胞【bāo】生长状【zhuàng】态良好时【shí】，可【kě】进【jìn】行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃去培养基后加入少【shǎo】量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清的培养【yǎng】基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。悬浮细胞冻存时，应【yīng】将细【xì】胞【bāo】 收集【jí】，1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟，少量保存上【shàng】清液（防止细【xì】胞吸走)，加入【rù】部分新鲜【xiān】培【péi】养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入1〇%DMSO后进行冻 存。
 
人急性淋巴细胞白血病细胞 (CEM/C1)注意事项：
收到细【xì】胞后【hòu】，若【ruò】发现干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有【yǒu】污染，请立【lì】即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的生物危害性【xìng】，必【bì】须【xū】在二级生【shēng】物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触【chù】过此【cǐ】细胞的【de】器【qì】皿需要灭菌后方能丢【diū】弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：器【qì】官：外周血疾【jí】病：急性淋巴细胞【bāo】白【bái】血病【bìng】细胞类【lèi】型:T淋巴母细胞
2)形态：淋巴母细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：可选择【zé】干【gàn】冰运【yùn】输及发【fā】送复苏存活【huó】细胞方式【shì】：（1)干【gàn】冰【bīng】运输，收到后立即转入液氮冻【dòng】存或【huò】直接复【fù】苏；（2)存【cún】活细胞，收到【dào】后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具【jù】体操作见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。