人胆管癌细胞（QBC-939）

人胆管癌细胞(QBC-939)
细胞介绍：
该细胞由第三军医大【dà】学【xué】西【xī】南【nán】医院建系于1997年，细胞来【lái】源于一【yī】位接受了肝胆手术【shù】的肝外胆管癌患者。
 
细胞特性
1)来源：肝外胆管肿瘤
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使用T25瓶充液发送活细胞【bāo】。收到细【xì】胞【bāo】后，请【qǐng】先在显微镜下检查【chá】细胞生长状【zhuàng】态，并将T25瓶置【zhì】于培养箱约6h或过夜后，再次【cì】检查细胞状态。若【ruò】状【zhuàng】态良好，可按照以下【xià】细胞培养步骤【zhòu】进行细胞后续处理【lǐ】操作。若发现可疑污染【rǎn】物，请及时与我们取得【dé】电联【lián】。细【xì】胞用途【tú】：仅供【gòng】使【shǐ】用。
 
人胆管癌细胞(QBC-939)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
2.准【zhǔn】备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸【suān】钠O.llg八)，90%;胎【tāi】牛血清【qīng】，10%。或准【zhǔn】备DMEM培养基【jī】(GIBCO)，90%;胎牛血清，10%;双抗【kàng】，1%。
3.培养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化【huà】碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
4.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配【pèi】。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中【zhōng】培养【yǎng】过夜（或将【jiāng】细【xì】胞【bāo】悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培养过夜）。第【dì】二天换液并【bìng】检查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果【guǒ】细胞【bāo】密度达80%-90%，即【jí】可【kě】进行传代培养。对于贴壁细胞【bāo】，传代可参考以下【xià】方法：
1.弃去【qù】培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细胞9-23次。
力口 2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-23分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微镜下观【guān】察细【xì】胞消化情况，若【ruò】细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻【qīng】敲【qiāo】几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终止消化。
按6-8ml/瓶补加培【péi】养基【jī】，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者【zhě】瓶中。
 
细胞冻存【cún】：待细胞生长状态良好时，可进行【háng】细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶【méi】，细胞【bāo】变圆脱【tuō】落后【hòu】，加入约lml含血清的培【péi】养基后【hòu】加【jiā】入【rù】冻存【cún】管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人胆管癌细胞(QBC-939)注意事项：
收到【dào】细胞后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立【lì】即【jí】与【yǔ】我们电联。
所有动物细【xì】胞均【jun1】视【shì】为有【yǒu】潜在【zài】的生物【wù】危害性，必须【xū】在二级生物安全【quán】台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触【chù】过此细胞的【de】器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。