人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）

人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)
细胞介绍：
SH-SY5Y是1970年建自骨【gǔ】瘤转移灶【zào】的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经【jīng】三次克【kè】隆【lóng】后的亚系(SK-N-SH—SH-SY—SH-SY5—SH-SY5Y)。该细胞显示中等水平的多巴胺【àn】-0 -羟基酶活【huó】性。SH-SY5Y细胞的【de】饱和【hé】密【mì】度大【dà】于1X106细【xì】胞/cm2。
 
细胞特性
1)来源：脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运【yùn】输【shū】和【hé】保存：使用含有胎牛血清的【de】2ml冻存管发【fā】送存【cún】活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操【cāo】作台弃【qì】去上【shàng】清，加入【rù】推荐【jiàn】使用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达细【xì】胞生【shēng】长瓶中。
状态良【liáng】好时，再进【jìn】行冻存【cún】。具体操【cāo】作见细胞培【péi】养【yǎng】步骤。细胞用途：仅供使用。
 
人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 MEM 及 F-12 培养基(MEM:GIBCO)，45%; F-12(F-12: GIBCO)，45%;胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培【péi】养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃【huǎng】解【jiě】冻，加【jiā】入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃【qì】去上【shàng】清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液加入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将
细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培养【yǎng】基，培养【yǎng】过夜）。第【dì】二天换液并检查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙【gài】、镁离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-23次。力口【kǒu】 2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置【zhì】于37°C培养【yǎng】箱中【zhōng】消化9-23分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若【ruò】细【xì】胞大【dà】部按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻【qīng】打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含【hán】8ml培【péi】养基的新皿中或者细【xì】胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱落【luò】后，加入【rù】约lml含【hán】血清的培养基后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥【huī】发【fā】干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立【lì】即与我们电联。所有动物细【xì】胞均视为有【yǒu】潜【qián】在的生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并请注意防【fáng】护，所有【yǒu】废液及接【jiē】触过此细胞【bāo】的器皿需要【yào】灭【miè】菌后方能丢弃【qì】。