人尤文氏肉瘤细胞（TC-32）

人尤文氏肉瘤细胞(TC-32)
细胞特性：
1)来源：人尤文氏肉瘤
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：
使用含有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送【sòng】存活细胞。收到细胞后【hòu】，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加【jiā】入推荐使【shǐ】用的【de】培养基后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者T75培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养【yǎng】，传代达到细【xì】胞【bāo】生长
状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
人尤文氏肉瘤细胞(TC-32)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培【péi】养基【jī】(DMEM-H，GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液【yè】体培养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养条【tiáo】件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液【yè】氮储【chǔ】存。
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，补
加l-2mL培养基后吹【chuī】匀【yún】。然后将所【suǒ】有细胞【bāo】悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二【èr】天【tiān】换液并检查【chá】细胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细【xì】胞9-23次。力口【kǒu】2m消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培【péi】养箱【xiāng】中消化9-23分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微镜【jìng】下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部
分【fèn】变【biàn】圆并脱落，迅速拿回【huí】操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀【yún】后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹【chuī】匀【yún】。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进【jìn】行细胞冻【dòng】存。贴壁【bì】细胞冻存【cún】时，弃去培养基后【hòu】加入少量胰酶，细【xì】胞变【biàn】圆脱落后，加入【rù】约lml含血【xuè】清的培养基后【hòu】加入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻存。
 
人尤文氏肉瘤细胞(TC-32)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立即【jí】与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有动物细【xì】胞均【jun1】视为有潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级【jí】生【shēng】物【wù】安全台内操作，并请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废【fèi】液及接触过此细胞【bāo】的器皿【mǐn】需要灭菌后方【fāng】能丢弃。