人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株（BEL/FU）

人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株(BEL/FU)

细胞介绍：
该细胞为氟尿嘧啶处理的人肝癌耐药细胞株。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注【zhù】意：客户收【shōu】到细【xì】胞后按照下面的【de】要求操作：培【péi】养瓶【píng】里面的培养液是【shì】不含【hán】药物的。待细胞【bāo】长【zhǎng】到9-23%的【de】汇合度时，去掉培养液，加入含8000ng/mlFU药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来【lái】，但是不要【yào】紧，通【tōng】过换【huàn】液可以去掉，下面【miàn】的细胞【bāo】待【dài】长满就可以消化传瓶了，这时可以【yǐ】一直用【yòng】含 药【yào】培养液来消化【huà】培养细胞，一两【liǎng】代之后可以将【jiāng】药【yào】物【wù】浓度提【tí】髙15000ng/ml，含【hán】药 培养液用于细胞培养都【dōu】没【méi】问题的，冻存的【de】时候就不要在冻存液里面【miàn】加药【yào】物了。
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎【tāi】牛血清，10%，添加1%双【shuāng】抗【kàng】，20000ng/ml氟尿【niào】喃啶。
2.培养条件：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存【cún】管在37°C水浴【yù】中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合均【jun1】匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离【lí】心【xīn】4分【fèn】钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将细【xì】胞悬【xuán】液加入10cm皿中，加入【rù】约【yuē】8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第二【èr】天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株(BEL/FU)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-23次。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于【yú】37°C培养箱【xiāng】中消化9-23分钟，然后在【zài】显微【wēi】镜下观【guān】察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】加少量【liàng】培【péi】养基终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例【lì】分到【dào】新【xīn】的含【hán】8ml培养【yǎng】基的【de】新皿中或者瓶中。
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细【xì】胞【bāo】冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细【xì】胞变圆脱落后【hòu】，加入约lml含【hán】血清的培养基后 加入冻【dòng】存管【guǎn】中【zhōng】，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】已挥【huī】发干净、冻【dòng】存管瓶【píng】盖【gài】脱落、破【pò】损【sǔn】及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害性，必【bì】须【xū】在二级生物安全台【tái】内【nèi】操作，并请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废【fèi】液及接触过此细胞【bāo】的器皿需【xū】要灭菌【jun1】后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌细胞
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株(BEL/FU)运输和保存：使【shǐ】用含【hán】有胎牛【niú】血清的2ml冻存【cún】管发送存活细胞。收到细【xì】胞后，可在【zài】1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁净操【cāo】作【zuò】台弃去上清，加入推荐使用的培养基【jī】后【hòu】转【zhuǎn】移至l〇cm培【péi】养皿或【huò】者【zhě】T25培养瓶中培养，传【chuán】代达到细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。