人肝癌细胞（BEL-7405）

人肝癌细胞(BEL-7405)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO 添加 NaHC031.5g八, D-葡【pú】萄【táo】糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培【péi】养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻【dòng】，加入4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然【rán】后将【jiāng】所有细胞悬液【yè】加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或【huò】将细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第【dì】二天换液并检 查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(BEL-7405)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用【yòng】不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细【xì】胞9-23次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-23分钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜下观察细【xì】胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿【ná】回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶【píng】后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将【jiāng】细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收【shōu】集细胞，1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL 培【péi】养液后吹匀【yún】，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新【xīn】的含【hán】8ml培养基的 新皿中【zhōng】或者瓶中。
方法二：可选择半数换【huàn】液方【fāng】式【shì】，弃去半数培养基后，将【jiāng】剩余细胞悬起【qǐ】，将细 胞悬液按1: 2到【dào】1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，可进行【háng】细胞【bāo】冻存【cún】。贴壁细胞冻存时【shí】，弃去培【péi】养基后加入少量胰【yí】酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的培养基【jī】后 加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收【shōu】集，1000RPM条件下【xià】离心4分钟，少【shǎo】量保存上清液（防止细胞吸【xī】走)，加入部分【fèn】新鲜培养基，加入到【dào】冻存管中【zhōng】，在冻【dòng】存【cún】管中加入1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞【bāo】有污染，请立即【jí】与【yǔ】我【wǒ】们电联【lián】。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生【shēng】物危【wēi】害性【xìng】，必须在二级生【shēng】物安全台内操【cāo】作【zuò】，并请【qǐng】注意防护【hù】，所有废液及接触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
人肝癌细胞(BEL-7405)运输和保【bǎo】存：可选择干冰【bīng】运输【shū】及发送复苏存活细胞【bāo】方式：（1)干冰【bīng】运输【shū】，收到【dào】后 立即转入液氮冻存或【huò】直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继【jì】续【xù】生长，传代达【dá】到【dào】细 胞生【shēng】长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养【yǎng】步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。
细胞用途：仅供使用。