小鼠肝癌细胞（H22）

小鼠肝癌细胞(H22)
细胞介绍
该细胞系分离自小鼠腹水，由大连医科学院建立。
 
细胞特性
1)来源：小鼠肝，肝癌
2)形态：贴壁生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含【hán】有【yǒu】胎牛血【xuè】清的【de】2ml冻【dòng】存【cún】管发送存活细【xì】胞。收【shōu】到【dào】细胞后【hòu】，可在1000RPM，常【cháng】温条件下【xià】，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使用的培养【yǎng】基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或【huò】者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操【cāo】作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠肝癌细胞(H22)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;北美胎【tāi】牛血清(UnitedStates，GIBCO，货号16000-044)，10%。
2. 培养条件：气【qì】相【xiàng】：空【kōng】气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储【chǔ】存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补 加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细【xì】胞悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基【jī】，培【péi】养【yǎng】过【guò】夜）。第二天【tiān】换液并检 查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消【xiāo】化9-23分钟，然后在显微镜【jìng】下观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变【biàn】圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养【yǎng】瓶后加【jiā】少量【liàng】培养【yǎng】基【jī】终止消【xiāo】化。
按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基【jī】，轻轻【qīng】打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】 钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到【dào】新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或【huò】者 瓶中。
细胞冻存【cún】：待细胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时，可【kě】进行【háng】细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清的【de】培养基后【hòu】加【jiā】入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进【jìn】行冻存。
 
小鼠肝癌细胞(H22)注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有污染【rǎn】，请【qǐng】立即与我们电联【lián】。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的生【shēng】物危害性【xìng】，必须在二级生【shēng】物安【ān】全台内操作【zuò】，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触【chù】过【guò】此细【xì】胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。