病毒转染小鼠细胞（PT-67）

病毒转染小鼠细胞(PT-67)
细胞介绍
PT-67细【xì】胞是源【yuán】于TK-MH/3T3的逆转录【lù】病毒包装细胞【bāo】。PT67isaretrovirus packagingcelllinederived fromTK-NIH/3T3cells.细胞【bāo】产生可结合长臂猿白血病病毒受体Glvr-1或双嗜【shì】性【xìng】逆转录病毒受体Ram-1的复制缺陷逆转录病毒【dú】载体【tǐ】颗【kē】粒。
 
细胞特性
1)来源：小鼠成纤维细胞
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保【bǎo】存：使用含【hán】有胎牛血清的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收【shōu】到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温【wēn】条件下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃【qì】去上清，加入【rù】推荐 使用的培养基【jī】后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代【dài】达到细【xì】胞生【shēng】长状态良【liáng】好【hǎo】时，再【zài】进行【háng】冻【dòng】存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
病毒转染小鼠细胞(PT-67)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBC0, 添加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。（DMEM液体培养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养【yǎng】条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅速【sù】摇【yáo】晃解冻【dòng】，加入4mL培养【yǎng】基【jī】混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后【hòu】将所有【yǒu】细胞悬【xuán】液加入培【péi】养瓶中培养过夜【yè】（或【huò】将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第【dì】二【èr】天换液【yè】并【bìng】检 查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力【lì】口 2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】
养箱中【zhōng】消化【huà】9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操【cāo】作台【tái】，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培【péi】养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。
 按6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培养【yǎng】基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。
将【jiāng】细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新皿中或者 瓶中【zhōng】。
 
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态【tài】良【liáng】好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁【bì】细【xì】胞冻存时【shí】，弃去培养基后加入【rù】少量胰酶【méi】，细胞变圆脱落【luò】后，加入约【yuē】lml含血清【qīng】的培养【yǎng】基后加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
病毒转染小鼠细胞(PT-67)注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰【bīng】己挥【huī】发干【gàn】净【jìng】、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均视为有潜【qián】在的生物危害性，必【bì】须在二级【jí】生【shēng】物安全台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接【jiē】触过此【cǐ】细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。